Page 86 - 《中国药房》2026年7期

一磨牙与第二磨牙之间，并于第一磨牙远中颊侧打结， （osteoprotegerin，OPG）的引物序列设计与合成均由生工
以进行造模；打结4周后，若小鼠出现牙龈红肿充血、牙 生物工程（上海）股份有限公司完成，具体信息见表1。
齿松动、牙周袋形成，且 Micro-CT成像系统检查显示存 表1 PCR引物序列和扩增产物长度
在牙槽骨吸收（表现为釉牙骨质界与牙槽骨嵴顶的距离 基因名称 引物序列（5′→3′） 扩增产物长度/bp
增大、骨体积分数和骨矿物质密度降低），则表明造模成 RANKL 正向：AAACGCAGATTTGCACGACTCG 187
反向：GTTGCAGTTCCTTCTGCACGG
[12]
功 。造模过程中，各组小鼠无死亡。造模成功后，桑 OPG 正向：AGGTTCCTGCACAGCTTCACAA 212
黄素组小鼠灌胃40 mg/kg桑黄素（基于前期预实验及文 反向：AAACAGCCCAGTGACCATTCCTA
[13]
献报道 确定的最佳剂量），且腹腔注射等体积的生理 GAPDH 正向：GGTGAAGGTCGGTGTGAACG 194
反向：CTCGCTCCTGGAAGATGGTG
[14]
盐水；SRT1720 组小鼠腹腔注射 5 mg/kg SRT1720 ，且
2.7 小鼠牙周组织中MDA、SOD水平检测
灌胃等体积的生理盐水；桑黄素+EX527 组小鼠灌胃 40
[15]
mg/kg 桑黄素，且腹腔注射 7.5 mg/kg EX527 ；对照组、 取“2.6”项下牙周组织适量，根据相应试剂盒说明书
方法操作，检测小鼠牙周组织中MDA、SOD水平。
模型组小鼠腹腔注射且灌胃等体积的生理盐水。各组
2.8 小鼠牙周组织中 SIRT1、PGC-1α、Nrf2 蛋白表达
小鼠每天给药1次，连续2周。
检测
2.2 小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平检测
取“2.6”项下牙周组织适量，加入 RIPA 裂解液提取
末次给药 24 h 后，所有小鼠以 1% 戊巴比妥钠（50
总蛋白，经BCA法测定蛋白浓度后，将蛋白进行变性处
mg/kg，腹腔注射）麻醉，于腹主动脉采血；将血样进行离
理；取变性后蛋白 30 μg，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯
心处理，以分离血清，然后根据相应 ELISA 试剂盒说明
酰胺凝胶电泳，经转膜、封闭后，加入 SIRT1、PGC-1α、
书方法检测小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平。
Nrf2、GAPDH（稀释度分别为1∶3 000、1∶4 000、1∶3 000、
2.3 小鼠牙槽骨吸收与骨密度指标检测
1∶6 000）一抗于 4 ℃条件下孵育过夜；次日加入相应二
取血完成后，各组随机选取6只小鼠处死，收集小鼠
抗（稀释度为1∶3 000）室温孵育2 h，经发光液处理后，采
左上颌骨并浸泡于4%多聚甲醛中，使用Micro-CT成像
用凝胶成像系统成像，然后采用 Image J 软件分析蛋白
系统以5 μm分辨率扫描小鼠左上颌骨创建3D图像，测
灰度值，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH）的灰度值比
量小鼠上颌第一磨牙颊侧釉牙骨质界与牙槽骨嵴顶的
值表示目的蛋白的表达水平。
距离，并计算骨体积分数和骨矿物质密度。
2.9 统计学方法
2.4 小鼠牙周组织病理学形态观察
采用GraphPad Prism 9软件进行统计分析。计量资
各组随机选取 6 只小鼠处死后，收集小鼠牙周组织
料经检验均符合正态分布，以x±s表示。多组间比较采
并以 4% 多聚甲醛固定，经梯度脱水、石蜡包埋、切片（5
用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。检
μm）后，取部分切片进行 HE 染色，经梯度脱水、二甲苯
验水准α＝0.05。
透明后，以中性树胶封片，再采用光学显微镜观察小鼠
3 结果
牙周组织病理学形态变化。
3.1 桑黄素对牙周炎小鼠血清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、
2.5 小鼠牙周组织中破骨细胞数检测
IL-10水平的影响
取“2.4”项下剩余切片，加入适量 TRAP 染色液在
与对照组比较，模型组小鼠血清中 TNF-α、IL-1β、
37 °C下孵育30 min；冲洗后，切片用苏木精复染5 min；
IL-6水平均显著升高，IL-10水平显著降低（P＜0.05）；与
冲洗后，采用光学显微镜观察牙周组织中TRAP阳性细
模型组比较，桑黄素组、SRT1720组小鼠血清中TNF-α、
胞（即破骨细胞，其细胞质呈红色或酒红色，紧贴骨组织
IL-1β、IL-6水平均显著降低，IL-10水平均显著升高（P＜
表面），并计数（选取5个不重叠的牙周组织视野，计数后
0.05）；与桑黄素组比较，桑黄素+EX527 组小鼠血清中
取平均值）。
TNF-α、IL-1β、IL-6 水平均显著升高，IL-10 水平显著降
2.6 小鼠牙周组织中核因子 κB 受体激活蛋白配体、骨
低（P＜0.05）。结果见表2。
保护素mRNA表达检测
表2 各组小鼠血清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 水平
取各组剩余的 6 只小鼠，处死后，收集小鼠牙周组
比较（x±s，n＝18，pg/mL）
织；取部分牙周组织采用 Trizol 试剂从中提取 RNA；将
组别 TNF-α IL-1β IL-6 IL-10
RNA 逆转录为 cDNA 后，以 cDNA 为模板进行 PCR 扩
对照组 181.36±9.65 121.57±6.83 36.58±2.34 101.44±8.35
增。PCR 扩增条件为 95 ℃预变性 5 min；95 ℃变性 30 模型组 345.56±17.75 a 265.54±14.41 a 125.59±8.43 a 26.67±2.33 a
s，60 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 30 s，共 40 个循环。以 桑黄素组 223.63±11.82 b 153.67±7.83 b 55.63±2.81 b 81.15±5.23 b
SRT1720组 241.15±12.67 b 162.88±8.19 b 63.45±2.93 b 72.66±5.45 b
GAPDH 为内参，采用 2 －ΔΔCt 法计算目的基因的表达水
桑黄素+EX527组 275.56±14.05 c 200.57±10.14 c 96.68±6.18 c 44.67±2.83 c
平。其中，核因子κB受体激活蛋白配体（receptor activa‐
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与桑黄素
tor of nuclear factor- κB ligand，RANKL）、骨 保 护 素 组比较，P＜0.05。
· 904 · China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 7 中国药房 2026年第37卷第7期