Page 63 - 《中国药房》2026年7期

2.1.2 供试品溶液的制备 素、13号峰为牡荆素、15号峰为20-hydroxyecdysone。将
取漆姑草药材粉末（过三号筛）1 g，精密称定，置于 12 批漆姑草药材的 HPLC 指纹图谱和对照图谱 R 进行
100 mL 具塞锥形瓶中；精密加入 70% 甲醇 25 mL，称定 相似度分析，得 S1～S12 样品的相似度分别为 0.993、
质量，超声处理30 min；取出，放冷，再称定质量，用70% 0.980、0.995、0.958、0.998、0.828、0.994、0.986、0.998、
甲醇补足减失质量；摇匀，静置，取上清液适量置于离心
0.982、0.991、0.997。这12批漆姑草药材中，有11批的相
管中，以12 000 r/min离心10 min，取上清液即得。
似度大于0.9，仅1批小于0.9，提示漆姑草药材的化学成
2.1.3 色谱条件
分具有较高的一致性。
本研究采用 ACE Excel C18-PFP 色谱柱（4.6 mm×
250 mm，5 μm），以甲醇（A）-0.1% 磷酸溶液（B）为流动 960
880
相进行梯度洗脱（0～5 min，95%B→80%B；5～15 min， 800
80%B→70%B；15～35 min，70%B→65%B；35～45 min， 720
640
65%B→60%B；45～55 min，60%B→30%B；55～60 min， mAU 560 1 5 10 11
30%B→5%B）；流速为0.8 mL/min；检测波长为230 nm； 480 2 3 4 6 7 8 9 12 1314 15 16 17 R
400
进样量为10 μL；柱温为40 ℃。 320 S12
S11
S10
240 S9 S8
2.1.4 精密度试验 160 S7 S6
S5
S4
80
吸取“2.1.2”项下供试品溶液（编号 S1）适量，按 S3 S2
0 S1
“2.1.3”项下色谱条件连续进样 6 次。以 5 号峰（维采 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60
t/min
宁-2，下同）为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间的
图1 12批漆姑草药材的HPLC指纹图谱和对照图谱R
RSD 均不大于 0.67%、相对峰面积的 RSD 均不大于
250
1.63%（n＝6），表明该方法精密度良好。 200 11
5 10
2.1.5 重复性试验 mAU 150
称取漆姑草药材粉末（编号 S1）适量，共 6 份，分别 100 15
50
按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.3”项下色谱 0 7 13
条件进样测定。以5号峰为参照峰，计算得各共有峰相 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
t/min
对保留时间的RSD均不大于1.57%、相对峰面积的RSD 5：维采宁-2；7：对羟基肉桂酸；10：apigenin-6-C-arabinoside-8-C-
均不大于2.38%（n＝6），表明该方法重复性良好。 glucoside；11：异荭草素；13：牡荆素；15：20-hydroxyecdysone。
2.1.6 稳定性试验 图2 混合对照品溶液的HPLC图
取同一份供试品溶液（编号S1），分别在室温下放置 2.1.8 CA
0、2、4、8、12、24 h 时按“2.1.3”项下色谱条件进样测定。 以12批漆姑草药材的17个共有峰的峰面积为变量
以 5 号峰为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间的
导入SPSS 27.0软件，采用组间连接法，以平方欧氏距离
RSD 均不大于 1.97%、相对峰面积的 RSD 均不大于
为样品间的距离度量，进行聚类分析。结果（图3）显示，
2.46%（n＝6），表明该供试品溶液在室温放置 24 h 内稳
当平方欧氏距离大于 10 时，12 批漆姑草药材聚为 3 类，
定性良好。
其中 S1～S5、S7、S9～S11 聚为一类，S6 为一类，S8 和
2.1.7 指纹图谱建立、共有峰指认及相似度评价
S12聚为一类。
取12批漆姑草药材样品，分别按“2.1.2”项下方法制
平方欧氏距离
备供试品溶液，按“2.1.3”项下色谱条件进样分析，得不 0 5 10 15 20 25
S3
同批次漆姑草药材的 HPLC 图，导入 2012 版《中药色谱
S9
指纹图谱相似度评价系统》。将编号S1样品的HPLC图 S11
设为参照图谱，设置时间窗宽度为 0.2 min，经多点校正 S1
S2
后进行 Mark 峰匹配，生成 12 批漆姑草药材的 HPLC 指 S10
纹图谱和对照图谱 R（图 1）。结果可知，12 批漆姑草药 S5
S7
材中共确定 17 个共有峰。通过与混合对照品溶液的 S4
HPLC 图（图 2）进行比对，共指认出 6 个共有峰，其中 5 S6
S8
号峰为维采宁-2、7号峰为对羟基肉桂酸、10号峰为api‐ S12
genin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside、11 号 峰 为 异 荭 草 图3 12批漆姑草药材的CA图

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