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2.1.9 PCA 表2 漆姑草药材中6种成分的线性关系考察结果
将 12 批漆姑草药材的 17 个共有峰的峰面积导入 成分 回归方程 r 线性范围/(μg/mL)
维采宁-2 Y=28 643X+1 097.0 0.999 9 4.73~151.41
SPSS 27.0软件进行PCA,以主成分特征值>1为提取标
对羟基肉桂酸 Y=49 420X-2 007.7 0.999 9 0.55~17.49
准,得前 4 个主成分的初始特征值依次为 9.254、2.860、 apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside Y=25 733X-5 429.6 0.999 9 7.17~229.32
1.670、1.419,累计方差贡献率达89.430%,表明前4个主 异荭草素 Y=35 493X+2 571.3 0.999 9 8.04~257.25
牡荆素 Y=32 048X-2 086.0 0.999 9 0.32~10.25
成分可以表示漆姑草的基本特征及指纹图谱的大部分 20-hydroxyecdysone Y=11 484X-4 341.5 0.999 9 6.33~202.47
信息。进一步分析发现,共有峰 3、5(维采宁-2)、9、10
2.2.5 精密度试验
(apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside)、11(异 荭 草
精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,按
素)、15(20-hydroxyecdysone)对主成分1贡献较大,共有
“2.2.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次,记录峰面积。
峰 2 对主成分 2 贡献较大,共有峰 8、13(牡荆素)对主成
结果显示,维采宁-2、对羟基肉桂酸、异荭草素、牡荆素、
分3贡献较大,共有峰6对主成分4贡献较大。
apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside、20-hydroxyecdy‐
2.2 漆姑草中6种成分的含量测定
sone 峰面积的 RSD 均不大于 2.11%(n=6),表明仪器精
2.2.1 对照品溶液与供试品溶液的制备
密度良好。
制备方法同“2.1.1”“2.1.2”项下,制得单一对照品贮
2.2.6 重复性试验
备液、混合对照品溶液和供试品溶液。
称取漆姑草药材粉末(编号 S1)适量,共 6 份,按
2.2.2 色谱条件
“2.2.1”项下方法制备供试品溶液,再按“2.2.2”项下色谱
色谱条件同“2.1.3”项下。
条件进样测定,记录峰面积并按外标法(external stan‐
2.2.3 专属性考察
分别精密吸取空白溶剂(70% 甲醇)和“2.2.1”项下 dard method,ESM)计算样品中维采宁-2、对羟基肉桂
混合对照品溶液、供试品溶液(编号 S1),按“2.2.2”项下 酸、apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside、异荭草素、牡
色谱条件进样测定,记录色谱图。结果(图4)显示,供试 荆素、20-hydroxyecdysone的含量。结果显示,各成分含
品溶液与混合对照品溶液图谱相同保留时间处有相应 量的 RSD 均不大于 1.03%(n=6),表明该方法重复性
的色谱峰,各待测成分与相邻色谱峰间的分离度均大于 良好。
1.5,且空白溶剂对测定无干扰,说明该方法专属性 2.2.7 稳定性试验
良好。 取同一份供试品溶液(编号S1),分别在室温下放置
4 0、2、4、8、12、24 h 时按“2.2.2”项下色谱条件进样测定,
500
1 3
450 记录峰面积。结果显示,维采宁-2、对羟基肉桂酸、
400
6 apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside、异荭草素、牡荆
350
2
300 5 混合对照品溶液 素、20-hydroxyecdysone 峰面积的 RSD 均不大于 2.94%
4
mAU 250 1 3 (n=6),表明该供试品溶液在室温放置 24 h 内稳定性
200
6 良好。
150
100 2 5 供试品溶液 2.2.8 加样回收率试验
50
称取已知待测成分含量的漆姑草药材粉末(编号
0 空白溶剂
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 S1)0.5 g,精密称定,平行 6 份;分别按对照品质量与样
t/min
1:维采宁-2;2:对羟基肉桂酸;3:apigenin-6-C-arabinoside-8-C- 品中含量 1∶1 的比例加入维采宁-2、对羟基肉桂酸、
glucoside;4:异荭草素;5:牡荆素;6:20-hydroxyecdysone。 apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside、异荭草素、牡荆
图4 混合对照品溶液、供试品溶液和空白溶剂的 素、20-hydroxyecdysone对照品,按“2.2.1”项下方法制备
HPLC图 供试品溶液,再按“2.2.2”项下色谱条件进样测定,并计
2.2.4 线性关系考察 算加样回收率。结果显示,维采宁-2、对羟基肉桂酸、
精密吸取“2.2.1”项下各单一对照品贮备液适量,加 apigenin-6-C-arabinoside-8-C-glucoside、异荭草素、牡荆
70%甲醇制成系列混合对照品溶液,按“2.2.2”项下色谱 素 、20-hydroxyecdysone 的 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为
条件进样测定,记录峰面积。以峰面积为纵坐标(Y)、对 96.20%、94.35%、98.92%、98.39%、101.58%、98.25%,
照品的质量浓度为横坐标(X,μg/mL)绘制标准曲线,得 RSD 分别为 1.08%、1.82%、1.48%、0.83%、1.60%、1.14%
到的线性回归方程见表2。 (n=6),表明该方法准确度良好。
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