Page 76 - 《中国药房》2026年6期
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          液 ，空白组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水，每天 1                          2.6 小鼠肝脏组织中Keap1/Nrf2/NQO1信号通路相关
          次，持续2周。于实验第15天，除空白组外，其余4组小                          蛋白表达的检测
          鼠灌胃12 mL/kg的白酒，共2次（间隔6 h）以建立急性酒                         采用Western blot法检测。另取“2.2”项下各组小鼠
          精性肝损伤小鼠模型（若后续肝组织病理学检查可见明                            肝组织，经冻存、解冻后，加入RIPA组织裂解液适量，于
          显 的 肝 脂 肪 变 性 和 炎 症 细 胞 浸 润 ，表 明 模 型 复 制            4 ℃下以 10 000 r/min 离心 5 min，取上清液，采用 BCA
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          成功 ）。                                               法对蛋白进行定量。取所得蛋白，在金属浴中加热变
          2.2 小鼠体重和肝脏指数的测定                                    性。取变性蛋白适量，经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺
              实验期间，每 3 天定时测量各组小鼠体重。于实验                        凝胶电泳分离后转移到聚偏二氟乙烯膜上，以快速封闭
          第 16 天，所有小鼠以 1% 戊巴比妥钠麻醉，于眼内眦取                       液 封 闭 10  min；洗 膜 3 次 ，加 入 Keap1、Nrf2、NQO1、
          血，血样经离心后取上层血清，分装，于－80 ℃下保存，                         GAPDH一抗（稀释比例分别为1∶500、1∶1 000、1∶1 000、
          备用。取血后，处死各组小鼠并剖取肝脏，经磷酸盐缓                            1∶2 000），于4 ℃下孵育12 h；洗膜后，加入相应二抗（稀
          冲液清理血渍、滤纸吸干水分后，称取其肝脏质量，并按                           释比例为 1∶25 000），于 37 ℃下孵育 30 min；显影、成像
          下式计算肝脏指数：肝脏指数（%）＝肝脏质量/小鼠体                           后，采用Image J软件进行分析，以目的蛋白与内参蛋白
          重×100%。随后，收集各组小鼠肝组织，用于后续                           （GAPDH）的灰度值比值表示目的蛋白的表达水平。
                                                              2.7 统计学方法
          检测。
                                                                  采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析，采用Ori‐
          2.3 小鼠血清肝功能、脂质代谢及氧化应激指标检测
                                                              gin 8.0 软件绘图。计量资料满足正态分布，以 x±s 表
              取“2.2”项下各组小鼠冻存的血清样品，经解冻后，
                                                              示，多组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用
          按相应试剂盒说明书操作，使用多功能酶标仪检测各组
                                                              LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
          小鼠血清肝功能指标（ALT、AST）、脂质代谢指标（TC、
                                                              3 结果
          TG）和氧化应激指标（MDA、GSH）水平。
                                                              3.1 小鼠体重和肝脏指数测定结果
          2.4 小鼠肝组织病理形态观察及评分
                                                                  各组小鼠体重变化折线图（图 1）显示，空白组小鼠
              采用苏木精-伊红（HE）染色法观察。随机选择
                                                              实验期间体重呈增长趋势；其余各组小鼠体重则呈先上
         “2.2”项下各组 3 只小鼠的肝组织适量，于 4% 多聚甲醛
                                                              升后降低的趋势；经23-乙酰泽泻醇B干预后，各药物组
          溶液中固定，再经50%、75%、90%乙醇梯度脱水，二甲苯
                                                              小鼠体重均较模型组有不同程度恢复。
          透明，浸蜡，包埋后切片。取切片适量，依次以苏木精、
                                                                   50
          伊红染液染色，经清洗后以中性树脂封片，使用显微镜                                                            空白组
                                                                                              模型组
                                                                   40
                                                 [8]
          观察肝组织的病理改变。同时，参考 Zhou 等 的标准，                                                        23-乙酰泽泻醇B低剂量组
          随机挑选4个视野，对肝组织病理形态进行评分，具体标                               体重/g  30                    23-乙酰泽泻醇B中剂量组
                                                                                              23-乙酰泽泻醇B高剂量组
          准为——0分：无明显病理改变；1分：轻度病变（病变范                               20
          围＜25%）；2分：中度病变（病变范围25%～50%）；3分：                          10
          重度病变（病变范围＞50%）。                                          0
                                                                                  10
          2.5 小鼠肝组织中CYP2E1蛋白表达的检测                                    0      5    时间/d    15    20
              采用免疫组化法检测。取“2.4”项下各组小鼠的肝                                  图1 各组小鼠体重变化折线图
          组织切片，用二甲苯脱蜡后，以枸橼酸盐缓冲液进行抗                                空白组、模型组和 23-乙酰泽泻醇 B 低、中、高剂量
          原修复10 min；以生理盐水冲洗，再用3%H2O2在室温下                      组 小 鼠 的 肝 脏 指 数 分 别 为（4.12±0.44）% 、（7.25±
          孵育 10 min 以封闭内源性过氧化物酶；随后，加入                         0.54）%、（5.73±0.31）%、（5.61±0.26）%、（5.23±0.18）%。
          CYP2E1一抗（稀释比例为1∶1 000）、GAPDH一抗（稀释                   与空白组比较，模型组小鼠的肝脏指数显著升高（P＜
          比例为 1∶400），于 4 ℃下孵育过夜；用磷酸盐缓冲液清                      0.01）；与模型组比较，23-乙酰泽泻醇B低、中、高剂量组
          洗3次，加入相应二抗（稀释比例为1∶500），于室温下孵                        小鼠的肝脏指数均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），且呈
          育 1 h；以 3，3′-二氨基联苯胺（DAB）显色后，再用苏木                    剂量依赖趋势。
          精复染，以树脂封片后，使用显微镜观察肝组织中                              3.2 小鼠血清肝功能、脂质代谢、氧化应激指标检测
          CYP2E1 蛋 白 的 表 达 情 况 。 采 用 Image  J 软 件 ，以          结果
          CYP2E1阳性表达区域（呈棕黄色或褐色）占组织总面积                             与空白组比较，模型组小鼠血清中 ALT、AST、TC、
          的百分比来表示该蛋白的表达水平。                                    TG、MDA 水平均显著升高，GSH 水平显著降低（P＜


          · 754 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 6                               中国药房  2026年第37卷第6期
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