Page 28 - 《中国药房》2025年22期
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2.1.4 色谱条件                                          血成分作用靶点通过jvenn在线网站（https：//www.bioin‐
              采用 Inertsil ODS-3（150 mm×2.1 mm，2 μm）色谱         formatics.com.cn）进行交集分析，获取交集靶点。
          柱，以 0.1% 甲酸（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱                      2.2.3 蛋白-蛋白互作网络的构建
         （0～4 min，5%B；4～10 min，5%B→8%B；10～12 min，                 将交集靶点导入STRING数据库（https：//cn.string-db.
          8%B；12～20  min，8%B→18%B；20～24  min，18%B→            org/），设置物种为“Homo sapiens”、置信值＞0.9，进行蛋
          20%B；24～28 min，20%B→23%B；28～34 min，23%B→            白-蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网络分析。
          30%B；34～38 min，30%B→38%B；38～42 min，38%B→            利用 Cytoscape 3.9.1 软件对 PPI 网络进行可视化分析。
          68%B；42～46 min，68%B→90%B；46～48 min，90%B）；           通过 Cytoscape 3.9.1 软件内置的 Analyze Network 工具
          柱温为35 ℃；流速为0.3 mL/min；进样量为2 μL。                     计算各节点的“degree”值，选取“degree”值＞2倍中位数
          2.1.5 质谱条件                                          的靶点作为关键靶点。
              采用电喷雾离子源在正、负离子模式下扫描，离子                          2.2.4 基因功能和通路富集分析
          源电压分别为 5 000 V（正离子）和－4 000 V（负离子），                      将 筛 选 出 的 关 键 靶 点 导 入 DAVID  6.8 数 据 库
          扫描范围为 m/z 50～1 000；离子源温度为 200 ℃；雾化                 （https：//david.ncifcrf.gov/），进行基因本体（Gene Onto-
          气压力为 29 psi；毛细管电压为 3.5 V；喷雾气压力为 50                  logy，GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto
          psi；辅助加热气压力为60 psi；气帘气压力为35 psi；去簇                  Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分
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          电压为 100 V；MS 碰撞能量分别为 10 V（正离子）和                     析，预测鸡骨草、毛鸡骨草抗肝炎关键靶点涉及的生物
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          －10 V（负离子），MS 碰撞能量分别为10 V（正离子）和                     功能与信号通路。
          －10 V（负离子），碰撞能量步长为 15 V；候选离子数为                      2.2.5 “活性成分-靶点”网络的构建
          550（正离子）和450（负离子）；干燥气体流量为8 L/min。                       将筛选获得的关键靶点及其对应的活性成分数据
          2.1.6 血清样品的前处理                                      导入Cytoscape 3.10.0软件，构建“活性成分-靶点”网络。
              取各组大鼠每个时间点的血浆各50 μL，混匀，加入                       2.3 分子对接
          600 μL 甲醇，涡旋 3 s 以沉淀蛋白。将混合物在 4 ℃下                       选取“活性成分-靶点”网络中排名前 4 位的活性成
          以 13 000 r/min 离心 10 min。干燥后，将残留物复溶于                分，以及 PPI 网络中排名靠前且与所选活性成分均存在
          100 μL 甲醇中，经 0.22 μm 微孔滤膜过滤，收集滤液作                   相互作用的靶点，将二者导入Autodock软件进行分子对
          为血清供试品。                                             接，并用Pymol软件对对接结果进行可视化分析。
          2.1.7 样品进样及数据分析                                     3 结果
              取“2.1.2”项下混合对照品溶液和“2.1.6”项下血清                   3.1 鸡骨草与毛鸡骨草入血成分分析结果
          供试品，分别按“2.1.4”“2.1.5”项下条件进样分析，收集                        通过对比混合对照品、空白血清、鸡骨草含药血清
          色谱图及质谱信息。使用 Data Analysis 4.3 软件对所采                 和毛鸡骨草含药血清的基峰图，并结合保留时间、准分
          集的数据进行分析。通过查阅豆科相思子属植物化学                             子离子峰和二级质谱碎片信息等，从鸡骨草、毛鸡骨草
          成分的相关文献，建立化学成分数据库，根据化合物名                            含药血清中均鉴定出35种原型成分，且均以黄酮类成分
          称、分子式、相对分子质量以及已知的特征离子碎片等                            为主。鸡骨草与毛鸡骨草含药血清中共有 24 种相同原
          信息，设置各化合物的相对分子质量误差为±5 ppm、二                         型成分，包括葫芦巴碱、半乳糖、半乳糖醛酸等。此外，
          级碎片离子误差为±10 ppm，对化合物进行鉴定。                           邻羟基苯甲酸、相思子碱等11种成分仅在鸡骨草含药血
          2.2 鸡骨草与毛鸡骨草入血成分的网络药理学分析                            清中检测到，葡萄糖酸、天冬氨酸等11种成分仅在毛鸡
          2.2.1 活性成分作用靶点的获取                                   骨草含药血清中检测到。鉴定的入血成分信息见表 1
              通过 Chemical Book（https：//www.chemicalbook.com/）  （基峰图可扫描本文首页二维码，进入“增强出版”页面
          和 PubChem 数据库（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）    查看附图1）。
          获取“2.1”项下鉴定出的各成分的化学结构信息，将mol                        3.2 网络药理学分析结果
          和 SMILES 格 式 的 文 件 导 入 PharmMapper 数 据 库            3.2.1 药材入血成分与抗肝炎交集靶点及PPI网络
         （http：//lilab-ecust.cn/pharmmapper/）和 Swiss Target Pre‐  鸡骨草、毛鸡骨草的入血成分作用靶点分别有803、
          diction 数据库（http：//www.swisstargetprediction.ch/），收  918个，二者与肝炎疾病（相关靶点1 975个）的交集靶点
          集鸡骨草与毛鸡骨草入血成分的作用靶点。                                 分别有 269、291 个。PPI 网络分析结果显示，信号传导
          2.2.2 交集靶点的获取                                       与转录激活因子 3、类固醇受体共激活因子（steroid re‐
              以“hepatitis”为 关 键 词 ，从 OMIM（https：//omim.       ceptor coactivator，SRC）、表皮生长因子受体（epidermal
          org/）、GeneCards（https：//www.genecards.org/）和 TTD 数  growth factor receptor，EGFR）、磷脂酰肌醇 4，5-二磷酸
          据库（https：//db.idrblab.net/ttd/）中检索疾病相关靶点，以          3-激酶催化亚基 α（phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate
          相关性评分（relevance score）大于其平均值（1.9分）作为                3-kinase  catalytic  subunit  alpha，PIK3CA）、蛋 白 激 酶 B1
          筛选标准，经合并、去重后，将其与鸡骨草、毛鸡骨草入                          （protein kinase B1，Akt1）等均为PPI网络核心靶点（图略）。


          · 2774 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 22                            中国药房  2025年第36卷第22期
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