Page 36 - 《中国药房》2025年17期
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could  significantly  attenuate  the  aforementioned  effects  of  high-concentration/high-dose  metformin （P＜0.05）.  CONCLUSIONS
          Metformin  can  inhibit  the  proliferation，  invasion，  migration  of  TE1  cells，  and  tumor  growth  of  nude  mice，  and  induce  cell
          apoptosis， the mechanism of which may be related to the inhibition of HIF-1α/IL-8 signaling pathway.
          KEYWORDS     metformin；  esophageal  squamous  cell  carcinoma；  HIF-1α/IL-8  signaling  pathway；  invasion；  proliferation；
          migration； apoptosis


              食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carci‐         Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡试剂盒（批号BC1050）购自湖
          noma，ESCC）是一种常见的食管癌，其临床症状包括吞                        北百奥斯生物科技有限公司；兔源HIF-1α、甘油醛-3-磷
          咽困难、疼痛、反流和体重减轻，严重降低了患者的生活                           酸脱氢酶（GAPDH）、IL-8一抗及山羊抗兔IgG二抗均购
              [1]
          质量 。尽管随着科学的发展，ESCC的治疗取得了很大                          自英国Abcam公司。
          进步，但 ESCC 患者的低生存率仍然是一个亟待解决的                         1.3 细胞与动物
              [2]
          问题 。相关证据表明，ESCC 细胞不受控制地增殖、转                             人食管鳞癌细胞 TE1 购自通派（上海）生物科技有
                                  [3]
          移是ESCC进展的主要原因 ，且手术、放化疗和免疫治                          限公司。
          疗这些目前常用治疗手段仍存在创伤大、毒副作用明                                 5～6周龄SPF级BALB/c雄性裸鼠由武汉贝赛模式
          显、治疗响应率有限等问题。因此，寻找新的有效的药                            生物科技有限公司提供[生产许可证号为 SCXK（鄂）
          物抑制 ESCC 细胞增殖、转移具有重要意义。二甲双胍                         2022-0029]，共 30 只，体重 18～20 g。所有 BALB/c 裸鼠
          是一种广泛使用的抗糖尿病药物，且已成为包括 ESCC                          均在特定的无病原体条件下饲养，适应性饲养 5 d 后进
                                     [4]
          在内的多种癌症的潜在治疗剂 。已有研究报道，二甲                            行实验。本动物实验获得武汉贝赛模式生物科技有限
                                         [5]
          双胍可抑制食管癌细胞侵袭和迁移 ，但具体机制尚不                            公司实验动物福利与伦理管理委员会批准[编号：BSMS
          完全明确。相关研究显示，低氧诱导因子 1α（hypoxia-                      动（福）第2024-03-251A号]。
          inducible factor-1α，HIF-1α）/白细胞介素 8（interleukin-    2 方法
                                                     [6]
          8，IL-8）信号通路的激活可促进食管癌的恶性进展 ，且                        2.1 细胞实验
          二甲双胍能够有效降低食管低级别上皮内瘤变患者瘤                             2.1.1 细胞培养
                                 [7]
          变组织中 HIF-1α 蛋白水平 。但二甲双胍是否可通过                            使 用 含 10% 胎 牛 血 清 的 RPMI-1640 培 养 基 在
          调控HIF-1α/IL-8信号通路来影响ESCC细胞的增殖、凋                     37 ℃、5%CO2条件下培养 TE1 细胞，每 2～3 d 更换 1 次
          亡、侵袭、迁移尚不清楚。为此，本研究拟从HIF-1α/IL-8                     培养基。
          信号通路角度出发，探究二甲双胍对 ESCC 细胞的体内                         2.1.2 细胞分组、给药
          外抑制作用及机制，以期为ESCC的治疗提供参考。                                将 TE1 细胞分为空白组，二甲双胍低、中、高浓度
          1 材料                                                组，IDF-11774 组，二甲双胍高浓度+DMOG 组，每组设
          1.1 主要仪器                                            置6个复孔。空白组细胞正常培养；二甲双胍低、中、高
              本研究所用主要仪器包括 BX53 型荧光显微镜（日                       浓度组细胞分别用 0.5、1、2 mmol/L 二甲双胍处理 24
                                                               [5]
          本 Olympus 公司）、Multiskan FC 型酶标仪[赛默飞世尔               h ；IDF-11774 组细胞用 20 μmol/L IDF-11774 处理 24
          科技（中国）有限公司]、FACS Celesta 型流式细胞仪（美                   h ；二甲双胍高浓度+DMOG组细胞用2 mmol/L二甲双
                                                               [8]
                                                                                         [9]
          国 BD 公司）、QuantStudio 5 型荧光定量 PCR 仪（美国               胍和10 μmol/L DMOG处理24 h 。
          ABI 公司）、Mini-PROTEAN Tetra 型蛋白电泳仪（美国                2.1.3 TE1细胞增殖检测
          Bio-Rad 公司）、Tanon 5200 型化学发光成像仪（上海天                    （1）EdU 染色法检测：将 TE1 细胞接种于 6 孔板中
                                                                    5
          能科技有限公司）等。                                         （5×10 个/孔），按“2.1.2”项下方法分组、给药后，每孔加
          1.2 主要药品与试剂                                         入 100 μL EdU 溶液，孵育 2 h；以 4% 多聚甲醛固定 15
              二甲双胍片（批号20231101，规格0.5 g）购自中美上                  min，再以0.5% Triton X-100孵育10 min，最后用4′，6-二
          海施贵宝制药有限公司；HIF-1α 抑制剂 IDF-11774 对照                  氨基-2-苯基吲哚染色 20 min。使用荧光显微镜观察细
          品、HIF-1α激活剂二甲基乙二酰氨基乙酸（dimethyloxalyl-               胞图像（阳性染色呈红色荧光），并计算TE1细胞EdU阳
          glycine，DMOG）对照品（批号分别为 HY-111387、HY-                性率。EdU 阳性率（%）＝EdU 阳性细胞数/总细胞数×
          15893，纯度分别为99.30%、99.69%）均购自美国MCE公                  100%。
          司；CCK-8试剂盒（批号20231009）购自上海泽叶生物科                        （2）CCK-8 法检测：将 TE1 细胞接种于 96 孔板中
                                                                    4
          技有限公司；5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色试                      （1×10 个/孔），按“2.1.2”项下方法分组、给药后，各孔加
          剂盒（批号 C01503）购自上海东寰生物科技有限公司；                        入10 μL CCK-8溶液，孵育1.5 h。使用酶标仪测定各孔


          · 2114 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 17                            中国药房  2025年第36卷第17期
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