Page 30 - 《中国药房》2025年17期
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水透析3 d，最后经冷冻干燥获得棕褐色粉末，即为富勒 光光度计测定其在 700～800 nm 波长范围内的 A 值，选
醇纳米颗粒。（3）FCN 的制备：将 10 mg 贻贝黏蛋白和 取734 nm波长处的特征吸收值，并计算自由基清除率。
1 000 mg 透明质酸钠溶于 20 mL 水中，加热（50 ℃），搅 自由基清除率（%）＝[A 对照－（A 样品－A 空白）]/A 对照×100%。
拌溶解得到水凝胶，然后将5 000 mg氧化铈纳米颗粒和 其中 A 对照指未加待测物质的自由基溶液的 A 值，A 样品指
100 mg富勒醇纳米颗粒加入到50 mL凝胶体系中，加热 加了待测物质的自由基溶液的 A 值，A 空白指不含自由基
到50 ℃后进行均质处理（3～5 min），均质降温后得到的 的溶液的A值。实验重复3次。
产物即为FCN。 2.3.2 DPPH自由基清除能力
2.2 材料表征 将等体积的DPPH溶液（0.04 mg/mL）与不同质量浓
2.2.1 氧化铈纳米颗粒的表征 度（25、50、100、200 μg/mL，浓度依据前期预实验结果得
（1）形貌表征：将合成的氧化铈纳米颗粒分散到去 出）的FCN溶液避光反应30 min，用紫外-可见-近红外分
离子水中（20 μg/mL），取10 μL氧化铈纳米颗粒水溶液 光光度计测定其在 500～600 nm 波长范围内的 A 值，选
均匀滴加于铜网上，待其干燥后置于高分辨透射电镜下 取 517 nm 波长处的特征吸收值，并计算自由基清除率
观察形貌。（2）晶体结构表征：将氧化铈纳米颗粒均匀铺 （同“2.3.1”项下）。实验重复3次。
在载样台上，使用 X 射线衍射分析仪测定其晶体结构，
2.3.3 •O2⁻清除能力
采用广角衍射测试，扫描角度为 4°～120°，扫描速度为
将 200 μL 磷酸盐缓冲液、100 μL 还原型辅酶Ⅰ二
每分钟 8°。（3）紫外-可见吸收光谱表征：将氧化铈纳米
钠溶液（8 mg/mL）、100 μL 氯化硝基四氮唑蓝溶液
颗粒置于载样台上铺平，使用紫外-可见-近红外分光光
（0.216 mg/mL）、100 μL 吩嗪硫酸甲酯溶液（2.7 μg/mL）
度计测定其在 200～500 nm 波长范围内的吸光度（A）
和 100 μL 不同质量浓度（25、50、100、200 μg/mL，浓度
值，得到其紫外-可见吸收光谱图。
依据前期预实验结果得出）的 FCN 溶液避光反应 10
2.2.2 富勒醇纳米颗粒的表征
min，在全功能酶标仪上测定其在517 nm波长处的A值，
（1）形貌表征：将合成的富勒醇纳米颗粒分散到水
并计算自由基清除率（同“2.3.1”项下）。实验重复3次。
中（10 μg/mL），取10 μL富勒醇纳米颗粒水溶液均匀滴
2.3.4 •OH清除能力
加于铜网上，待其干燥后置于高分辨透射电镜下观察形
将 200 μL 磷 酸 盐 缓 冲 液 、100 μL TMB 溶 液（4
貌。（2）红外吸收光谱表征：将冷冻干燥的富勒醇纳米颗
mmol/L）、100 μL 硫酸亚铁溶液（2.7 mg/mL）、10 mL
粒与溴化钾以质量比 1∶100 压制成透明薄片后，用红外
H2O2 （4 mmol/L）和 100 μL 不同质量浓度（25、50、100、
光谱仪进行检测，得到其红外吸收光谱图。（3）紫外-可
200 μg/mL，浓度依据前期预实验结果得出）的FCN溶液
见吸收光谱表征：配制质量浓度为 20 μg/mL 的富勒醇
避光反应10 min，在全功能酶标仪上测定其在560 nm波
纳米颗粒水溶液，在使用水扫平基线后，用紫外-可见-近
长处的A值，并计算自由基清除率（同“2.3.1”项下）。实
红外分光光度计测定其在200～500 nm波长范围内的A
验重复3次。
值，得到其紫外-可见吸收光谱图。
2.4 FCN的紫外线屏蔽能力评价
2.2.3 FCN的表征
采用国际通用的 SPF 检测仪对样品进行标准化测
（1）形貌表征：将均质后的FCN冻干，经研钵研磨分
试。根据ISO 24443：2021标准，在室温为20～30 ℃、相
散后，取适量粉末均匀撒布于导电胶表面，随后进行溅
对湿度为 40%～60% 的条件下，将 FCN 按照 0.3 mg/cm 2
射和镀金处理，并采用高分辨场发射扫描电镜观察其形
貌。（2）紫外-可见吸收光谱表征：将FCN置于600 μL比 的量涂布于空白聚甲基丙烯酸甲酯板的粗糙面，将样品
色皿中，在使用水扫平基线后，用紫外-可见-近红外分光 在暗处静置 20 min 后，测定其 SPF 和 UVA 防护等级
光度计测定其在 200～500 nm 波长范围内的 A 值，得到 （protection grade of UVA，PA）。实验重复3次。
其紫外-可见吸收光谱图。 2.5 FCN的生物安全性评价
[11]
2.3 FCN的自由基清除能力评价 本研究根据《药品安全性评价指南》要求 ，采用标
本研究采用体外自由基清除实验对 FCN 抗氧化活 准化的药理学检测方法对FCN进行系统的安全性评价。
性进行定量分析。 2.5.1 常规9项检测
2.3.1 ABTS自由基清除能力 严格依据 2020 版《中国药典》（四部）中常规 9 项检
[12]
将 3.84 mg/mL 的 ABTS 溶液与 0.66 mg/mL 的过硫 测实验步骤（包括微生物限度与重金属检测） 对 FCN
酸钾溶液于室温下避光反应 16 h 得到 ABTS 自由基溶 进行安全性评价，包括菌落总数、霉菌和酵母菌总数、耐
液。将等体积的 ABTS 自由基溶液与不同质量浓度 热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、铅、砷、
（25、50、100、200 μg/mL，浓度依据前期预实验结果得 汞、镉，其中重金属的药用辅料标准为铅＜10 mg/kg、
出）的FCN溶液避光反应10 min，用紫外-可见-近红外分 砷＜2 mg/kg、汞＜1 mg/kg、镉＜5 mg/kg。
· 2108 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 17 中国药房 2025年第36卷第17期
