Page 66 - 《中国药房》2025年15期
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1、2 mg/kg，根据预实验结果设定），每组 10 只。除空白                    将蛋白变性后，取蛋白 40 μg 上样进行电泳（恒压 180
          对照组外，其余小鼠通过腹腔注射 OVA 和吸入 OVA 喷                       V），13 min后转膜至聚偏二氟乙烯膜上，用含5%脱脂奶
          雾构建 HP 模型，以出现呼吸急促和气喘为模型成功标                          粉的 TBST 浸泡聚偏二氟乙烯膜，室温封闭 2 h；加入
          准 [8―9] 。具体方法如下：造模小鼠在第 1、8、15 天腹腔注                  TGF-β 1、Col-Ⅲ、FN、GAPDH 一抗（稀释比例分别为
          射0.1 mL造模剂[含200 μg OVA和1 mg Al（OH） 3]，共注            1∶1 000、1∶1 000、1∶ 5 000、1∶5 000），于 4 ℃孵育过夜；
          射3次；从造模第22天开始，每天使造模小鼠暴露于1%                          洗膜后，加入相应二抗（稀释比例为 1∶10 000），室温孵
          OVA喷雾中30 min（超声喷雾仪），同时开始灌胃相应药                       育2 h；曝光显色，利用Image Pro Plus 6.0软件分析，以目
          物干预，给药容积为10 mL/kg，每天1次，连续喷雾、给药                      标蛋白与内参蛋白（GAPDH）条带灰度值的比值表示目
          11 d。                                               标蛋白的表达水平。
          2.2 肺功能检测                                           2.7 统计学方法
              末次给药结束后 30 min，腹腔注射 1% 戊巴比妥钠
                                                                  使用 GraphPad Prism 9.5 软件对数据进行统计分
         （70 mg/kg）麻醉各组小鼠，以仰卧位将其放置于小动物
                                                              析。计量资料满足正态分布，以 x±s 表示，多组间比较
          肺功能检测仪内，手术钝性分离暴露气管并进行气管插
                                                              采用方差分析，方差齐性时组间两两比较采用 LSD-t 检
          管，然后记录小鼠肺功能指标：用力肺活量（forced vital
                                                              验，方差不齐时组间两两比较采用 Tamhane’s T2 检验。
          capacity，FVC）、第 1 秒用力呼气容积（forced expiratory
                                                              检验水准α＝0.05。
          volume in one second，FEV1）、FEV1/FVC、最大呼气流量
                                                              3 结果
         （peak expiratory flow，PEF）。
                                                              3.1 枸地氯雷他定对模型小鼠肺功能的影响
          2.3 气道高反应性测定
                                                                  与空白对照组比较，模型组小鼠FVC、FEV1、FEV1/
              肺功能检测完毕后，采用小动物全身体积描记检测
                                                              FVC、PEF均显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，各给药
          系统评估各组小鼠气道高反应性。将小鼠放入雾化室
                                                              组小鼠FVC、FEV1、FEV1/FVC（除枸地氯雷他定低剂量
          先适应 1 min，以乙酰甲胆碱溶液按雾化质量浓度 1、5、
                                                              组外）、PEF 均显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）。结果
          10、15、20、25 mg/mL 从低到高检测，程序为雾化 1 min、
          记录3 min、恢复1 min，记录气道阻力。                             见表1。
                                                                  表1 各组小鼠肺功能指标比较（x±s，n＝10）
          2.4 血清和支气管肺泡灌洗液中炎症因子水平检测
                                                              组别             FVC/mL  FEV1/mL  （FEV1/FVC）/%  PEF/（mL/s）
              完成气道高反应测定后，所有小鼠仰卧固定，于腹
                                                              空白对照组          5.81±0.22  4.68±0.37  80.68±5.98  65.39±3.13
          主动脉取血，室温静置2 h后，以3 500 r/min离心10 min                 模型组            3.81±0.56 a  2.17±0.29 a  57.52±7.28 a  41.09±4.36 a
          后取上清液，按照 ELISA 试剂盒说明书操作，使用酶标                        泼尼松组           5.07±0.55 b  3.69±0.49 b  72.63±5.14 b  57.44±2.81 b
                                                              枸地氯雷他定低剂量组     4.36±0.32 c  2.66±0.28 b  61.07±3.92  49.96±2.64 b
          仪检测小鼠血清中的IL-1β、IL-4、IL-6水平。采用0.9%                   枸地氯雷他定中剂量组     4.82±0.37 b  3.18±0.36 b  66.16±8.51 c  53.30±3.45 b
          氯化钠溶液对小鼠左侧肺部进行灌洗，收集支气管肺泡                            枸地氯雷他定高剂量组     5.23±0.36 b  3.91±0.20 b  74.92±4.18 b  58.69±3.28 b
          灌洗液，以 3 500 r/min 离心 10 min 后取上清液，按照                   a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模
                                                              型组比较，P＜0.05。
          ELISA试剂盒说明书操作，使用酶标仪检测小鼠支气管
                                                              3.2 枸地氯雷他定对模型小鼠气道高反应性的影响
          肺泡灌洗液中IL-8、IL-13、IL-17A水平。
                                                                  空白对照组、模型组、泼尼松组和枸地氯雷他定低、
          2.5 肺组织病理观察
                                                              中、高剂量组小鼠的气道阻力依次为（2.01±0.22）、
              完成血清和肺泡灌洗液采集后，将小鼠安乐死。每
                                                             （4.05±0.25）、（2.96±0.23）、（3.23±0.29）、（2.90±0.35）、
          组取6只小鼠肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定24 h后
                                                             （2.77±0.40）cmH2O/（mL·s）（1  cmH2O≈98.066  5  Pa）。
          脱水包埋于石蜡中，制备石蜡切片（厚度 3 μm），进行
          Masson 染色后，封片，采用荧光显微镜于白光下观察大                        与空白对照组比较，模型组小鼠气道阻力显著升高（P＜
          鼠的肺组织病理变化。应用 Image Pro Plus 6.0 软件测                 0.01）；与模型组比较，各给药组小鼠气道阻力均显著降
          算切片中阳性染色（呈蓝色）面积，并计算阳性染色百分                           低（P＜0.05或P＜0.01）。
          比[阳性染色百分比（%）＝阳性染色面积/总面积×                            3.3 枸地氯雷他定对模型小鼠血清中炎症因子的影响
          100%]以评价病变程度。                                           与空白对照组比较，模型组小鼠血清中IL-1β、IL-4、
          2.6 肺组织中纤维化相关蛋白表达的检测                                IL-6 水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药
              采用 Western blot 法检测。每组另取 3 只小鼠肺组                组小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-6（除泼尼松组和枸地氯雷他
          织，提取组织中的总蛋白，采用BCA法测定总蛋白浓度。                          定低剂量组外）水平均显著降低（P＜0.01）。结果见表2。


          · 1884 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 15                            中国药房  2025年第36卷第15期
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