Page 63 - 《中国药房》2025年14期

2.2.3 各单味饮片及提取物供试品溶液
取丹参饮片细粉和黄芪饮片细粉各 1 g，三七饮片
细粉和银杏叶提取物各 0.05 g，分别按“2.2.1”项下方法
S15
制备，得各单味饮片及提取物的 HPLC-UV 供试品溶液 S13 S14
S12
S11
和HPLC-ELSD供试品溶液。 S10
1 800 S8 S9
2.3 指纹图谱的建立 1 500 S6 S7
2.3.1 精密度试验 mAU 1 200 S3 S4 S5
900
取“2.2.1”项下 2 种供试品溶液（编号 S10），按“2.1” 600 S1 S2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 R
项下色谱条件连续进样 6 次，分别以丹酚酸 B（HPLC- 300
0
UV）和三七皂苷 R1 （HPLC-ELSD）为参照峰，得到各共 0 20 40 60 80 100 120 140 160
有峰相对保留时间的RSD均小于0.33%（n＝6），相对峰 t/min
A. HPLC-UV图谱
面 积 的 RSD 均 小 于 2.84%（n＝6），表 明 方 法 精 密 度
良好。
2.3.2 重复性试验
S15
取“2.2.1”项下 2 种供试品溶液（编号 S10），各 6 份， S12 S14
S13
S11
按“2.1”项 下 色 谱 条 件 进 样 测 定 ，分 别 以 丹 酚 酸 B S9 S10
（HPLC-UV）和三七皂苷R1 （HPLC-ELSD）为参照峰，得到 1 400 S7 S8
1 200 S6
各共有峰相对保留时间的RSD均小于0.45%（n＝6），相对 1 000 S3 S4 S5
800
峰面积的 RSD 均小于 2.66%（n＝6），表明方法重复性 mAU 600 S2
400 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 S1
良好。 200 R
2.3.3 稳定性考察 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
取“2.2.1”项下 2 种供试品溶液（编号 S10），分别在 t/min
B. HPLC-ELSD图谱
室温下放置0、3、6、9、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件进
图1 15批银丹活血通瘀颗粒的HPLC叠加指纹图谱和
样测定，分别以丹酚酸 B（HPLC-UV）和三七皂苷 R1
对照指纹图谱R
（HPLC-ELSD）为参照峰，得到各共有峰相对保留时间
的RSD均小于0.59%（n＝6），相对峰面积的RSD均小于 Rb1 ）、峰 21（人参皂苷 Rd）；从 HPLC-ELSD 色谱图（图
2.42%（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置 24 h 内稳 2B）中指认了8个共有峰，分别为峰23（银杏内酯C）、峰
定性良好。 25（银杏内酯 A）、峰 26（银杏内酯 B）、峰 31（三七皂苷
2.3.4 指纹图谱建立与相似度评价 R1 ）、峰 32（人参皂苷 Rg1/人参皂苷 Re，峰重叠且多次调
取 15 批样品，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液， 整洗脱比例也未能将其分离）、峰 38（人参皂苷 Rb1 ）、峰
再按“2.1”项下色谱条件进样并记录色谱图。将15批样 39（黄芪甲苷）、峰40（人参皂苷Rd）。
品的色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》 2.4 网络药理学筛选药效成分
（2012 版），以 S10 为参照图谱，设定时间窗宽度为 0.1 2.4.1 作用靶点预测
min，经多点校正后进行 Mark 峰匹配，得到 15 批样品的 将指纹图谱指认的17个化合物作为候选化合物，从
叠加指纹图谱；采用中位数法生成对照指纹图谱R。结 PubChem 数据库（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）中
果（图 1）显示，15 批样品共标定 40 个共有峰，其中 获取候选化合物的线性表达式，分别导入 Swiss Target
HPLC-UV指纹图谱中标定21个，HPLC-ELSD指纹图谱 Prediction 数 据 库（http：//www. swisstargetprediction. ch）
中标定 19 个。与对照指纹图谱 R 对比，HPLC-UV 指纹 和 SuperPRED 数据库（https：//prediction.charite.de/index.
图谱中15批样品的相似度为0.988～1.000，HPLC-ELSD php）预测候选化合物的作用靶点，将预测的全部靶点导
指纹图谱中15批样品的相似度为0.956～0.999，提示15 入 UniProt 数据库（http：//www.uniprot.org/）进行归一化
批样品的制备工艺稳定，主要化学成分相似。 处理，去重后共获得385个作用靶点。
2.3.5 指纹图谱共有峰指认 2.4.2 疾病靶点预测及化合物-疾病交集靶点的获取
取“2.2”项下 2 种供试品溶液（编号 S10）、混合对照 以“ischemic stroke”为关键词，在 GeneCards 数据库
品溶液 1、混合对照品溶液 2、各单味饮片及提取物的 2 （https：//www. genecards. org/）、TTD 数 据 库（https：//db.
种供试品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记 idrblab.net）及OMMI数据库（https：//omim.org）中检索并
录色谱图。通过与混合对照品图谱和单味饮片图谱比 筛选IS 疾病靶点，其中GeneCards数据库纳入连接度≥
对，从 HPLC-UV 色谱图（图 2A）中指认了 10 个共有峰， 5.1（2 倍中位数）的靶点；合并上述全部靶点，去重后共
分别为峰 3（咖啡酸）、峰 5（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、峰 6 获得 1 857 个疾病靶点。将“2.4.1”项下的 385 个作用靶
（芦丁）、峰 9（迷迭香酸）、峰 11（芒柄花苷）、峰 12（紫草 点与1 857个疾病靶点进行映射，共获得化合物-疾病交
酸）、峰14（丹酚酸B）、峰19（芒柄花素）、峰20（人参皂苷 集靶点148个。

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