Page 64 - 《中国药房》2025年14期
P. 64

3 500
            3 000
                                              三七供试品溶液
            2 500
                                              银杏叶提取物供试品溶液
            2 000
           mAU                                丹参供试品溶液
            1 500
                                              黄芪供试品溶液
            1 000
             500                              供试品溶液（S10）
              0                               混合对照品溶液1
              －10  0                                  20           40             60             80                               100                                    120          140       160
                             t/min
                         A. HPLC-UV图谱
            5 000
            4 500
            4 000                             三七供试品溶液
            3 500
                                              银杏叶提取物供试品溶液
            3 000
           mAU  2 500                         丹参供试品溶液
            2 000
                                              黄芪供试品溶液
            1 500
            1 000                             供试品溶液（S10）                      图3 PPI网络图
             500
                                              混合对照品溶液2
              0                                                   GO 富集分析共得到 399 个条目，其中生物学过程
              －5    0                            10           20            30            40                                     50                                          60                 70              80  （biological process，BP）占 250 个条目，细胞组分（cellu‐
                             t/min
                        B. HPLC-ELSD图谱                        lar component，CC）占 41 个条目，分子功能（molecular
             3：咖啡酸；5：毛蕊异黄酮葡萄糖苷；6：芦丁；9：迷迭香酸；11：芒柄              function，MF）占 108 个条目。BP 主要包括胞外信号调
          花苷；12：紫草酸；14：丹酚酸B；19：芒柄花素；20：人参皂苷Rb 1；21：人          节激酶 1（extracellular signal-regulated kinase 1，ERK1）
          参皂苷Rd；23：银杏内酯C；25：银杏内酯A；26：银杏内酯B；31：三七皂
                                                              和 ERK2 级联的正调控、炎症反应和磷脂酰肌醇 3 激酶
          苷R 1；32：人参皂苷Rg 1/人参皂苷Re；38：人参皂苷Rb 1；39：黄芪甲苷；
                                                             （phosphoinositide  3-kinase，PI3K）/蛋 白 激 酶 B（protein
          40：人参皂苷Rd。
          图2 各单味饮片及提取物溶液、混合对照品溶液及供                            kinase B，Akt）信号转导的正调控等；CC主要包括质膜、
                                                              细胞表面和黏着斑等；MF主要包括酶结合、相同蛋白质
               试品溶液的HPLC图
                                                              结合和整合素结合等过程。
          2.4.3 蛋白质-蛋白质相互作用网络构建及核心靶点                              KEGG富集分析共得到137条主要通路，排除肿瘤、
          筛选                                                  乙型肝炎等与疾病不相关的通路后，主要涉及PI3K/Akt
              将“2.4.2”项下的 148 个化合物-疾病交集靶点导入                   信 号 通 路 、脂 质 与 动 脉 粥 样 硬 化 、低 氧 诱 导 因 子 1
          STRING 数据库（https：//string-db.org/cgi/input.pl），物种  （hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）信号通路、促分裂原
          设置为“homo sapiens”，最小相互作用阈值设置为最高                     活 化 的 蛋 白 质 激 酶（mitogen-activated  protein  kinase，
          置信度（0.9），隐藏与无关联性的靶点，得到蛋白质-蛋白                        MAPK）信号通路和肿瘤坏死因子（tumor necrosis fac‐
          质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络图。将         tor，TNF）信号通路等。
          PPI网络图导入Cytoscape 3.7.2软件进行可视化分析，移                  2.4.5 药效成分、靶点和通路筛选
          除与主要网络离散的节点后，共获得97个潜在靶点、274                             为进一步确定银丹活血通瘀颗粒的药效成分，为后
          条边的 PPI 网络图（图 3）。利用 Cytoscape 3.7.2 软件中             续成分含量测定做铺垫，将指认出的17个化合物、97个
         “Network Analyzer”功能对网络进行拓扑属性分析，以                    潜在靶点和 P 值排前 20 位的主要通路运用 Cytoscape
          连接度≥2 倍中位数，介数中心性和接近中心性均大于                           3.7.2软件构建“成分-靶点-通路”网络图（图4）。以介数
          中位数为筛选条件，共得到26个核心靶点，其中连接度                           中心性、接近中心性及连接度均大于中位数为筛选条
          排前 10 位的核心靶点分别为 SRC、AKT1、STAT3、JUN、                 件，得到 17 个化合物可能是银丹活血通瘀颗粒治疗 IS
          MAPK1、MAPK3、PI3KCA、ESR1、PI3KCB、EGFR。                的药效成分，且连接度越高，说明化合物对应的药效越
          2.4.4 基因本体、京都基因与基因组百科全书富集分析                         强；97 个潜在靶点中，有 22 个靶点满足筛选条件，与 26
              将“2.4.3”项下的97个潜在靶点导入DAVID数据库                    个核心靶点取交集，共得到 NFκB1、PIK3CA、PIK3CB、
         （https：//david. ncifcrf. gov/）进 行 基 因 本 体（gene  onto-  MAPK1、AKT1、AKT2、PDGFRA、MAPK3、EGFR、RAF1、
          logy，GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto                       ITGB1、HIF1A、STAT3 13 个靶点，可能是银丹活血通瘀
          Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分        颗粒发挥治疗IS作用的关键靶点；20条核心通路中，除
          析，P＜0.01表示差异有统计学意义。                                 红细胞癌基因B（ErbB）信号通路外，其余通路连接都区


          · 1746 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 14                            中国药房  2025年第36卷第14期
   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69