Page 48 - 《中国药房》2025年12期
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Cy3.5@PLGA-PEG-FA+free FA and Cy3.5@PLGA-PEG. When the mass concentration of TP was≥15.63 ng/mL， the survival rates
          of  activated  cells  in  the TP@PLGA-PEG-FA  groups  were  significantly  lower  than  those  of  the  same  mass  concentration  of  free TP
          groups （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  The  prepared  TP@PLGA-PEG-FA  has  high  stability，  good  blood  compatibility，  active
          targeting and cytotoxicity to inflammatory cells.
          KEYWORDS     triptolide； rheumatoid arthritis； cytotoxicity； targeting preparation； nanoparticles



              类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种全身            1 材料
          性免疫病，可导致患者多处关节肿胀、受损，甚至造成关                           1.1 主要仪器
          节畸形，致残率较高。据统计，我国 RA 的年发病率为                              本研究所用主要仪器包括 Galaxy-170s 型 CO2培养
                                         [1]
          0.34%～0.45%，患者人数超过500万 。RA的发病机制                     箱和 5424R 型离心机（德国 Eppendorf 公司）、Cary-3500
          尚不明确，但与多种细胞有关，其中巨噬细胞在病程进                            型紫外分光光度计（美国 Agilent 公司）、Zetasizer Nano
                               [2]
          展过程中具有关键作用 。在炎症关节中，浸润的单核                            型激光粒度分析仪（英国 Malvern 公司）、TS2 型倒置光
          细胞处于缺氧环境，进而激活巨噬细胞，而这些被激活                            学显微镜和 FV3000 型激光共聚焦显微镜（日本 Olym‐
          的巨噬细胞会高表达叶酸受体（folate receptor，FR）、清                 pus 公司）、TM3000 型扫描电子显微镜（日本 Hitachi 公
                            [3]
          道夫受体等多种受体 。FR 与叶酸（folic acid，FA）具有                  司）、168-1130 型酶标仪（美国 Bio-Rad 公司）、CP214 型
          很强的亲和力，能介导巨噬细胞大量摄取FA，从而诱发                           电子天平（美国Ohaus公司）等。
          RA 。因此，FR可作为靶向治疗RA的潜在靶点。                            1.2 主要药品与试剂
             [4]
                                                                  TP 原料药（批号 A10261，纯度 96.8%）和对照品（批
              雷公藤甲素（triptolide，TP）是从药用植物雷公藤中
                                                              号 B20709，纯度 98%）均购自上海源叶生物科技有限公
          提取的环氧化二萜内酯化合物，具有抗炎症、抗类风湿、
                                                              司；PLGA-PEG（批号R-PL1025-10K，聚乳酸与羟基乙酸
          调节免疫、抑制血管增生及诱导细胞凋亡等作用，对RA
                                                              的摩尔比为 85∶15）和 PLGA-PEG-FA（批号 R-PL1045-
                            [5]
          具有一定的改善作用 。但TP存在水溶性差，肝、肾、生
                                                              10K，聚乳酸与羟基乙酸的摩尔比为 85∶15）、荧光染料
          殖毒性较大，生物利用度低等不足，使得其临床应用严
                                                              Cy3.5（批号RM0212406）均购自西安瑞禧生物科技有限
                [6]
          重受限 。可见，改进现有剂型有望成为实现TP减毒增
                                                              公 司 ；聚 乙 烯 醇 [poly（vinyl  alcohol），PVA；批 号
          效的重要策略。靶向聚合物纳米粒子能有效改善药物
                                                              P434371]、脂多糖（批号 L381866）均购自上海阿拉丁生
          的溶解度、稳定性、生物利用度，并可延长药物在体内的
                                                              化试剂股份有限公司；RPMI-1640 培养基（批号 G4534）
          循环时间，同时还能通过靶向治疗来减少药物的毒副作
                                                              和 DMEM 培养基（批号 G4511）均购自武汉赛维尔生物
          用 。聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic
            [7]
                                                              科技有限公司；4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染液
          acid），PLGA]是一种生物相容性良好的可降解高分子聚
                                                             （批号 28718-90-3）购自美国 Sigma 公司；CCK-8 细胞增
          合物，因其没有毒性，常被作为药物载体以制备纳米制
                                                              殖及毒性检测试剂盒（批号CA1210）购自北京索莱宝科
          剂，进而用于癌症、免疫系统疾病及心脑血管疾病等治
                                                              技有限公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，
                [8]
          疗领域 。聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是一种
                                                              水为蒸馏水。
          具有良好生物相容性的聚合物，可显著延长纳米粒子的
                                                              1.3 实验动物与细胞
          血液循环时间，增加药物在病灶部位的富集，被广泛用
                                                                  健康 SD 大鼠，雌性，体重 180～220 g，8 周龄，购自
                        [9]
          于生物制药领域 。FA具有分子生物相容性好、稳定性                           北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证号为
          高、易于合成、无免疫原性等优点，现已成为一种极具应                           SCXK（京）2021-0011。所有大鼠均饲养在温度 18～
                          [8]
          用前景的靶向配体 。考虑到FA与FR特异性结合这一                           26 ℃、相对湿度 40%～70%、定期通风换气的环境中。
          特点，用 FA 修饰载药纳米粒子可有助于提高药物的靶                          本动物实验方案经吉林医药学院伦理委员会批准（编号
                                  [10]
          向性、减少药物的毒副作用 。基于此，本研究拟采用                            2023-ZYY-005）。
          乳化挥发法制备载TP靶向FR的聚合物纳米粒子（简称                               小鼠单核巨噬细胞RAW264.7由吉林医药学院吉林
         “TP@PLGA-PEG-FA”），对其形态、粒径、电位进行表                      省抗体工程科技协同创新中心提供。
          征，对其载药量及包封率进行测定，对其血液相容性和                            2 方法
          稳定性进行评价，并通过体外实验对该制剂的靶向性及                            2.1 TP@PLGA-PEG-FA等纳米粒子的制备
          对 RA 的改善效果进行探讨，以期为 TP 的深入开发和                            采用乳化挥发法制备。取 TP 原料药 1 mg，溶于甲
          RA的临床治疗提供参考。                                        醇 1 mL 中；称取 PLGA-PEG-FA 10 mg，溶于二氯甲烷


          · 1458 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 12                            中国药房  2025年第36卷第12期
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