Page 66 - 《中国药房》2025年9期

2.2 样本采集及FBG测定
末次给药后，大鼠禁食不禁水 12 h，随后以戊巴比
妥钠麻醉，腹主动脉采血。部分血液用于 FBG 测定；
剩余部分血液经离心分离后制备血清，然后将其置于
－20 ℃冰箱中保存备用。采血完成后，颈椎脱臼处死大
鼠，打开腹腔分离肾组织，将其分为 2 份（每份包括 6 只
大鼠的样本），置于－80 ℃冰箱中保存备用。
2.3 血清中糖代谢、炎症相关指标测定
取冻存的血清样本，常规解冻后，采用 ELISA 法测
定血清中 FINS 和炎症相关指标（IL-1β、IL-6 和 TNF-α）
水平，并计算胰岛素抵抗指数（insulin resistance index，
[13]
HOMA-IR）。HOMA-IR＝FBG×FINS/22.5 。具体操
作严格按照相应试剂盒说明书执行。
2.4 肾组织中氧化应激、炎症相关指标测定
取冻存的肾组织，制成匀浆液，离心取上清后，采用
ELISA法检测肾组织中氧化应激相关指标（SOD、MDA、
GSH-Px）和炎症相关指标（BUN、Cr）水平。
2.5 肾组织病理变化观察
采用苏木精-伊红（HE）染色法观察。取冻存的肾组
织，常规制备石蜡切片（厚度约4 μm）后，行HE染色，利
用显微镜观察大鼠肾组织病理变化。
2.6 肾组织中JNK/NF-κB信号通路相关蛋白表达检测
采用 Western blot 法检测。取冻存的肾组织，研磨，
加RIPA缓冲液提取组织中总蛋白。采用BCA法对总蛋
白进行定量，并经高温变性后，进行 10% 十二烷基硫酸
钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（电压 120 V，电泳时间 1 h）分
离，然后转至聚偏二氟乙烯膜上，用 5% 脱脂奶粉封闭。
将膜与 JNK、p-JNK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、GAPDH
（稀释比例均为 1∶1 000）一抗在 4 °C 下孵育过夜；洗膜
后，与 IgG 二抗（稀释比例 1∶2 000）在室温下孵育 1 h。
TM
采用化学发光法进行显影，采用Image Lab 图像采集和
分析软件对蛋白条带进行定量。以目标蛋白与内参蛋
白（GAPDH）条带灰度值的比值表示目标蛋白的相对表
达量，以 p-JNK 与 JNK、p-NF-κB p65 与 NF-κB p65 的比
值表示JNK、NF-κB p65蛋白的磷酸化水平。
2.7 统计学方法
采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。符合正
态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素
方差分析，组间两两比较采用 SNK-q 检验。检验水准
α＝0.05。
3 结果
3.1 柠檬苦素对大鼠糖代谢相关指标的影响
与 对 照 组 比 较 ，模 型 组 大 鼠 FBG、FINS 水 平 和
HOMA-IR 均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，柠檬
苦素低、中、高剂量组大鼠 FBG、FINS 水平和 HOMA-IR
均显著降低（P＜0.05），且存在明显的量效关系（P＜
0.05）；与柠檬苦素高剂量组比较，联合组大鼠 FBG、
FINS 水平和 HOMA-IR 均显著升高（P＜0.05）。结果
见表1。
· 1084 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 9
表1 各组大鼠糖代谢相关指标比较（x±s，n＝12）
组别 FBG/（mmol/L） FINS/（mlU/L） HOMA-IR
对照组 5.23±0.61 9.16±1.02 2.34±0.35
模型组 18.63±2.11 a 21.05±2.39 a 12.36±1.46 a
柠檬苦素低剂量组 13.03±1.47 b 18.56±2.07 b 9.89±1.07 b
柠檬苦素中剂量组 9.96±1.04 bc 15.79±1.73 bc 8.05±0.96 bc
柠檬苦素高剂量组 6.57±0.73 bcd 12.43±1.36 bcd 6.67±0.79 bcd
联合组 15.26±1.66 e 19.67±2.11 e 11.16±1.25 e
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与柠檬苦
素低剂量组比较，P＜0.05；d：与柠檬苦素中剂量组比较，P＜0.05；e：与
柠檬苦素高剂量组比较，P＜0.05。
3.2 柠檬苦素对大鼠血清中炎症相关指标的影响
与对照组比较，模型组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、
TNF-α 水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，柠檬
苦素低、中、高剂量组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水
平均显著降低（P＜0.05），且存在明显的量效关系（P＜
0.05）；与柠檬苦素高剂量组比较，联合组大鼠血清中IL-
1β、IL-6、TNF- α 水 平 均 显 著 升 高（P＜0.05）。 结 果
见表2。
表2 各组大鼠血清中炎症相关指标水平比较（x±s，
n＝12，mg/kg）
组别 IL-1β IL-6 TNF-α
对照组 12.36±1.37 9.86±1.27 16.34±1.75
模型组 36.17±3.89 a 25.12±2.86 a 39.16±4.12 a
柠檬苦素低剂量组 30.25±3.21 b 21.06±2.34 b 32.25±3.51 b
柠檬苦素中剂量组 23.69±2.57 bc 17.35±1.85 bc 26.38±2.76 bc
柠檬苦素高剂量组 15.27±1.68 bcd 12.06±1.36 bcd 20.55±2.23 bcd
联合组 32.14±3.35 e 23.33±2.51 e 35.24±3.71 e
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与柠檬苦
素低剂量组比较，P＜0.05；d：与柠檬苦素中剂量组比较，P＜0.05；e：与
柠檬苦素高剂量组比较，P＜0.05。
3.3 柠檬苦素对大鼠肾组织中氧化应激相关指标的
影响
与对照组比较，模型组大鼠肾组织中SOD、GSH-Px
水平均显著降低（P＜0.05），MDA 水平显著升高（P＜
0.05）；与模型组比较，柠檬苦素低、中、高剂量组大鼠肾
组织中 SOD、GSH-Px 水平均显著升高（P＜0.05），MDA
水平均显著降低（P＜0.05），且存在明显的量效关系
（P＜0.05）；与柠檬苦素高剂量组比较，联合组大鼠肾组
织中SOD、GSH-Px水平均显著降低（P＜0.05），MDA 水
平显著升高（P＜0.05）。结果见表3。
表3 各组大鼠肾组织中氧化应激相关指标水平比较
（x±s，n＝6）
组别 SOD/（U/mg） MDA/（nmol/mg） GSH-Px/（U/mg）
对照组 22.15±2.57 3.26±0.35 21.06±2.65
模型组 5.07±0.65 a 15.67±1.69 a 7.23±0.86 a
柠檬苦素低剂量组 10.22±1.16 b 12.01±1.32 b 11.57±1.37 b
柠檬苦素中剂量组 15.03±1.72 bc 8.16±0.94 bc 14.28±1.65 bc
柠檬苦素高剂量组 19.75±2.13 bcd 5.27±0.63 bcd 19.37±2.11 bcd
联合组 8.66±0.97 e 13.68±1.45 e 9.66±1.23 e
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与柠檬苦
素低剂量组比较，P＜0.05；d：与柠檬苦素中剂量组比较，P＜0.05；e：与
柠檬苦素高剂量组比较，P＜0.05。
中国药房 2025年第36卷第9期