Page 54 - 《中国药房》2025年7期
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（P＜0.01）.  Compared  with  the  model  group，  the  histopathological  damage  of  the  kidney  in  rats  was  improved  in  administration
          groups；  the  levels  of  24  h-UTP，  BUN，  SCr， ALT  and  glycolipid  indexes，  the  expressions  of  p53  protein  and  mRNA，  as  well  as
          the  expression  of  miR-214  were  all  significantly  decreased  or  down-regulated，  while ALB  level，  LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ，  the  expressions
          of LC3 mRNA， the expressions of ULK1 and Beclin-1 protein and mRNA were significantly increased or up-regulated （P＜0.01）.
          CONCLUSIONS  TG  can  alleviate  renal  damage  in  DN  rats，  and  improve  their  liver  and  renal  function，  as  well  as  glucose  and
          lipid levels. These effects may be related to the regulation of the p53/miR-214/ULK1 axis and the restoration of cellular autophagy.
          KEYWORDS     Tripterygium wilfordii multiglycoside； diabetic nephropathy； renal injury； autophagy； p53/miR-214/ULK1 axis



              糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是以蛋白尿             1.2 主要药品与试剂
          持续和肾小球滤过率下降为主要表现的慢性肾脏病，是                                TWM 片（批号 230801，规格 10 mg）购自江苏美通
          引发终末期肾脏病的重要因素之一，严重影响患者的生                            制药有限公司；缬沙坦胶囊（批号X3156，规格80 mg）购
          活质量 。目前，DN的治疗主要是通过控制血糖来延缓                           自北京诺华制药有限公司；链脲佐菌素（streptozotocin，
                [1]
                               [2]
          病情的发展，但效果甚微 。研究表明，肾小管细胞自噬                           STZ；批号102651899）购自美国Sigma公司；柠檬酸钠缓
          减少是诱发 DN 的病理因素之一，调控自噬在维持肾脏                          冲液（批号 2312005）购自北京索莱宝科技有限公司；兔
                                     [3]
          稳态方面具有至关重要的作用 。由此推测，调控细胞                            抗 β-肌动蛋白（β-actin）、p53、ULK1、Beclin-1、微管相关
          自噬水平，使其趋于正常、稳定，可能是治疗 DN 的重要                         蛋白 1 轻链 3（microtubule-associated protein 1 light chain
          途径之一。                                               3，LC3）抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫
              肿瘤蛋白 p53 是细胞自噬的关键调节因子，存在于                       球蛋白 G 二抗、RNA 提取液（货号分别为 GB15003、
          近曲小管上皮细胞的细胞核内，可促进自噬相关蛋白                             GB15627、29005-1-AP、GB112053、GB113801、GB23303、
                                          [4]
          Beclin-1 的 泛 素 化 ，从 而 引 发 自 噬 ；而 微 RNA-214          G3013）均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；鱼跃血糖
                                                              试纸（批号1311065）购自江苏鱼跃医疗设备股份有限公
         （microRNA-214，miR-214）可通过靶向结合 p53 来抑制
                                                              司；血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（serum
          下游 UNC-51 样激酶 1（UNC-51-like kinase 1，ULK1）通
                                                              creatinine，SCr）、白蛋白（albumin，ALB）、丙氨酸转氨酶
          路，从而抑制细胞自噬          [5―7] 。此外，有研究者指出，抑制
                                                             （alanine  transaminase，ALT）、甘 油 三 酯（triglyceride，
          p53、miR-214 活性或恢复 ULK1 表达，均可能改善自噬
                                                              TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、葡萄糖测定试
              [8]
          受损 。由此可见，p53/miR-214/ULK1 轴可能在 DN 的
                                                              剂 盒（批 号 分 别 为 AUZ3094、AUZ2544、AUZ3215、
          发生发展过程中发挥了关键作用。
                                                              AUZ3165、AUZ3171、AUZ3140、AUZ2287）均购自美国
              雷公藤多苷（Tripterygium wilfordii multiglucoside，
                                                              Beckman Coulter公司；PCR所用引物由武汉赛维尔生物
          TWM）被称为“中草药激素”，是将雷公藤根去皮后精制
                                                              科技有限公司设计、合成。
          而成的一种脂溶性混合物，可通过抑制炎症反应、调节
                                                              1.3 实验动物与饲料
          自噬、延缓肾纤维化等途径来改善DN               [9―10] 。尽管目前尚
                                                                  34 只 6～8 周龄的 SPF 级雄性 SD 大鼠，购自郑州市
          无直接研究证实TWM与p53/miR-214/ULK1轴有关，但
                                                              惠济区华兴实验动物养殖场，动物生产许可证号为
          鉴于 TWM 可调节细胞自噬，且该信号轴在自噬调控中
                                                              SCXK（豫）2019-0002。所有大鼠均饲养于河南中医药
          具有关键作用，遂本课题组推测 TWM 或许能通过调控
                                                              大学第一附属医院动物实验中心[环境温度（22±2）℃、
          此信号轴来恢复细胞自噬水平，从而减轻 DN 大鼠的肾
                                                              相对湿度 40%～70%，昼夜各 12 h 循环]，自由摄食、饮
          损伤。基于此，本研究拟构建DN大鼠模型，以p53/miR-                       水。本实验方案经河南中医药大学第一附属医院实验
          214/ULK1 轴出发，初步探讨 TWM 对 DN 大鼠肾组织的                   动物福利伦理委员会审查，批准文号为FYDW2024003。
          保护作用，以期为TWM的临床应用提供理论依据。                                 高糖高脂饲料和普通饲料分别购自北京华阜康生
          1 材料                                                物科技股份有限公司和辽宁长生生物技术股份有限公司。
          1.1 主要仪器                                            2 方法
              本研究所用主要仪器包括AU5800型全自动生化分                        2.1 分组、造模与给药
          析仪（美国Beckman Coulter公司）、BA400型全自动特定                     34只大鼠以普通饲料适应性喂养7 d，测得其血糖、
          蛋白分析仪（西班牙 BioSystems 公司）、SCG-W2000 型                尿蛋白均正常。按随机数字表法将其分为正常组（6只）
          化学发光成像系统（武汉赛维尔生物科技有限公司）、                            和造模组（28 只）。造模组大鼠予高糖高脂饲料喂养 6
          Eclipse Ci-L型正置光学显微镜（日本Nikon公司）、鱼跃                  周，再按 35 mg/kg 的剂量单次腹腔注射 STZ 溶液（以柠
          悦准Ⅰ型（710）血糖仪（江苏鱼跃医疗设备股份有限公                          檬酸钠缓冲液为溶剂）；正常组大鼠予普通饲料喂养 6
          司）、CRX Connect 型荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪                    周，再按相同体积单次腹腔注射柠檬酸钠缓冲液。腹腔
         （美国Bio-Rad公司）等。                                      注射 72 h 后，采集造模组大鼠尾静脉血，使用血糖仪测


          · 816 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 7                               中国药房  2025年第36卷第7期
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