Page 59 - 《中国药房》2025年6期
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refractory epilepsy rats by inhibiting the activation of COX-2/PGE2 signaling pathway， inhibiting inflammation and oxidative stress，
          thereby alleviating hippocampal neuronal damage in refractory epilepsy rats.
          KEYWORDS    refractory epilepsy； Chaihu longgu muli decoction； neuronal damage； COX-2/PGE2 signaling pathway


              癫痫是一种常见的神经系统疾病，是多种原因导致                         批号K0250）购自美国Sigma-Aldrich公司；大鼠COX-2、
          的脑部神经元阵发性异常放电。癫痫患者大多数可通                            PGE2、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）
          过常规药物治疗得到有效控制，但仍有近 1/3 的癫痫患                        酶 联 免 疫 吸 附 测 定（ELISA）试 剂 盒（货 号 分 别 为
          者对抗癫痫药物不敏感，发展成为难治性癫痫，使治疗                           ml058808、ml003036、ml002859）均购自上海酶联生物科
                  [1]
          难度增加 。神经炎症是癫痫发作后脑组织病理改变的                           技有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒、TUNEL 细
          主要原因 。研究表明，癫痫的脑内炎症反应与环氧合                           胞凋亡试剂盒（货号分别为 G1120、T2196）均购自北京
                  [2]
          酶 2（cyclooxygenase-2，COX-2）的表达增加及前列腺素              索莱宝科技有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dis‐
          E2（prostaglandin E2，PGE2）水平升高密切相关。COX-2            mutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒
          作为前列腺素（prostaglandin，PG）合成的限速酶，可在癫                （货号分别为 A001-3-2、A003-1-2）均购自南京建成生物
          痫发作时被激活，进而诱发氧化应激反应，并将花生四                           工程研究所；兔源 COX-2、P 糖蛋白（P-glycoprotein，P-
          烯酸转化为 PG 等有害物质，从而进一步加剧脑内炎症                         gp）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体及辣根过氧化
          反应和神经元损伤。多项研究显示，COX-2已成为治疗                         物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）抗体（批号分
          癫痫的潜在药物靶点之一           [3―4] 。                      别为 ab179800、ab170904、ab9485、ab205718）均购自英
              柴胡加龙骨牡蛎汤出自《伤寒论》。现代药理学研                         国 Abcam 公 司 ；iScript  cDNA 合 成 试 剂 盒（批 号
          究显示，柴胡加龙骨牡蛎汤可抑制戊四氮诱导的癫痫小                           1708890）购自美国Bio-Rad公司。
          鼠海马星形胶质细胞内COX-2/PGE2炎症反应通路，从                       1.3 实验动物
                          [5]
          而发挥抗癫痫作用 。然而，该方对难治性癫痫海马神                               102 只雄性 Wistar 大鼠，SPF 级，7～8 周龄，体重
          经元损伤的影响尚不清楚。为此，本研究采用海人藻酸                           220～240 g，购自华中科技大学动物实验中心，生产许可
          诱导难治性癫痫大鼠模型，探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对模                           证号为 SCXK（鄂）2021-0009。大鼠饲养于温度（22±
          型大鼠神经元损伤的影响，并基于COX-2/PGE2信号通                       2）℃、相对湿度为（55±5）%、每12 h光/暗循环的环境中，
          路分析其潜在的作用机制，以期为柴胡加龙骨牡蛎汤治                           自由进食和饮水。本研究获得武汉华联科生物技术有限
          疗难治性癫痫提供理论依据。                                      公司动物伦理委员会批准（批件号为HLK-202406546）。
          1 材料                                               2 方法
          1.1 主要仪器                                           2.1 分组、造模与给药
              68001型动物脑立体定位仪购自深圳市瑞沃德生命科                          实验分为造模组（n＝90）和假手术组（n＝12）。造
          技股份有限公司；BX61型电动显微镜购自日本Olympus                      模组采用侧脑室注射海人藻酸的方法建立癫痫大鼠模
                                                               [6]
          公司；Multiskan  FC 型酶标仪购自美国 Thermo Fisher            型 ：采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠后，将其头部固
                       TM
                                ®
          Scientific公司；LightCycler  480 Ⅱ型实时荧光定量聚合           定在脑立体定位仪上，局部备皮、消毒后，正中切开头部
                                                                                                          [7]
          酶链反应（RT-qPCR）仪购自瑞士Roche公司。                         皮肤，暴露颅骨和前囟，参考《大鼠脑立体定位图谱》 进
          1.2 主要药品与试剂                                        行侧脑室定位，以颅骨钻钻孔，使用微量注射器在硬脑
              柴胡加龙骨牡蛎汤（柴胡12 g、龙骨4.5 g、黄芩4.5 g、               膜下 3.8 mm 处下针，向右侧脑室内缓慢注射 3 μL 海人
          生姜 4.5 g、铅丹 4.5 g、人参 4.5 g、桂枝 4.5 g、茯苓 4.5 g、      藻酸溶液（0.5 μg/μL，以生理盐水为溶剂，注射速度为1
          牡蛎4.5 g、半夏6 g、大黄6 g、大枣6枚）由本院中药制剂                   μL/min），注射完毕后留针5 min。向假手术组大鼠侧脑
          中心以水煮醇提法制备，质量浓度为 1 g/mL（以生药量                       室注射 0.9% 生理盐水，其余操作同前。造模后按照
                                                                           [8]
          计）。COX-2抑制剂塞来昔布对照品（纯度99.09%，批号                     Racine 分级标准 评定大鼠的癫痫发作级别，若造模后
          HY-14398）购自美国MCE公司；COX-2过表达慢病毒载                    2 h内出现Ⅳ级以上发作表示癫痫大鼠造模成功。为降
          体 pcDNA3.1-COX-2（正向序列为 5′-GGGGTACCGC-              低大鼠死亡率，造模组大鼠在造模 2 h 后通过腹腔注射
          CACCATGCTCTTCCGAGCTGTG-3′，反向序列为 5′-                地西泮（10 mg/kg，以生理盐水为溶剂）终止癫痫持续状
          CCGCTCGAGTTACAGCTCAGTTGAACGCC-3′）及其                态。最终，造模组有80只大鼠在造模2 h内出现Ⅳ级以
          对照慢病毒空载体 pcDNA3.1-NC（序列为 5′-TTCT-                  上发作，造模成功率为88.89%。将造模成功的大鼠于每
          CCGAACGTGTCACGT-3′）均由上海吉凯基因医学科                     天同一时间给予卡马西平 125 mg/kg（以生理盐水为溶
          技股份有限公司设计、合成；引物序列由宝生物工程（大                          剂）灌胃，每天1次，给药28 d后连续7 d观察大鼠癫痫发
          连）有限公司设计、合成；海人藻酸对照品（纯度≥99%，                        作时的脑电图。若大鼠出现Ⅰ级及以上癫痫发作且脑


          中国药房  2025年第36卷第6期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 6    · 693 ·
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