Page 22 - 《中国药房》2025年6期

骨质疏松（osteoporosis，OP）是一种因骨形成与骨吸 滨副教授鉴定均为真品。
收失衡而导致的代谢性疾病，表现为骨量减少和骨微结 骨化三醇软胶囊（批号2110051，规格0.25 μg）购自
构受损，可使患者骨折风险增加 。卵巢早衰（prema‐ 青岛正大制药有限公司；顺铂对照品（批号HY-17394，纯
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ture ovarian failure，POF）是指女性在40岁前卵巢功能异 度 99.70%）购自美国 MCE 公司；免疫组化显色试剂盒
常衰退，主要特征是雌激素水平显著降低而促性腺激素 （批号K5007）购自美国Agilent公司；E2、核因子κB受体
水平异常升高，表现为闭经、不孕等症状，严重影响女性 激活蛋白配体（receptor activator of nuclear factor-κB li‐
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生育和整体健康 。研究指出，卵巢功能衰退引起的雌 gand，RANKL）、NETs、25-羟维生素D3[25（OH）D3]、BGP
激素水平显著下降会导致骨形成与骨吸收平衡失调，加 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为 JM-
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速骨质受损和骨量流失，促进OP的发生发展 ；此外，炎 01981R1、JM-01911R1、JM-10980R1、JM-01918R1、JM-
症反应也是 OP 的重要致病因素之一，可通过影响骨骼 02028R1）均购自江苏晶美生物科技有限公司；鼠抗维生
系统来干扰成骨细胞和破骨细胞之间的平衡，从而导致 素 D 受体（vitamin D receptor，VDR）抗体、兔抗 MPO 抗
骨量流失 。中性粒细胞在炎症反应中会释放一种特殊 体、兔抗β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号分别为67192-1-
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的网状结构，即中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extra‐ Ig、22225-1-AP、20536-1-AP）均购自武汉三鹰生物技术
cellular traps，NETs），其由 DNA、组蛋白、髓过氧化物酶 有限公司；兔抗 25-羟基维生素 D-1α-羟化酶（又称
（myeloperoxidase，MPO）和中性粒细胞弹性蛋白酶（neu‐ CYP27B1）抗体、兔抗 CYP24A1 抗体、辣根过氧化物酶
trophil elastase，NE）等成分构成，能够捕获并消灭病原 （HRP）标记的羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗（批号分别为
微生物，是先天性免疫系统的重要胞外防御屏障 。然 A1716、A1805、AS014）均购自武汉爱博泰克生物科技有
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而，若 NETs 过度活化或长期存在则可能会对机体产生 限公司；兔抗 NE 抗体（批号 AF0010）购自美国 Affinity
负面影响，上述过程伴随大量炎症介质的释放，可激活 公司；兔抗 CitH3 抗体（批号 NB100-57135）购自美国
破骨细胞、增加骨吸收，从而破坏骨代谢平衡，导致骨量 Novus Biologicals 公司；HRP 标记的羊抗鼠免疫球蛋白
流失 [4，6] 。维生素 D（vitamin D，VD）作为关键的免疫调 G 二抗（批号 BS12478）购自美国 Bioworld Technology
节因子，不仅可通过促进钙、磷吸收来维持骨骼健康，而 公司。
且能通过降低 MPO、NE、瓜氨酸化组蛋白 H3（citrulli‐ 1.3 实验动物
nated histone H3，CitH3）水平来抑制 NETs 生成，在多种 SPF级雌性SD大鼠54只，体重190～210 g，8～9周
炎症性疾病的治疗中具有重要作用 [7－8] 。 龄，购自斯贝福（北京）生物技术有限公司[动物生产许
当归补血汤源于李东垣的《内外伤辨惑论》，由当 可证号为 SCXK（京）2019-0010]。大鼠均饲养于温度、
归、黄芪组方而成，具有补气生血之效。本课题组前期 湿度适宜的动物房内，自由摄食、饮水。本实验已获得
研究发现，当归补血汤能有效降低POF大鼠血清促卵泡 贵州中医药大学实验动物伦理审查委员会批准（伦理号
激素和促黄体生成素水平，提升血清雌二醇（estradiol， 20230100）。
E2 ）和抗米勒管激素水平；同时，该方还可恢复 OP 大鼠 2 方法
骨小梁结构，并通过抑制 VD 限速酶 1α，25-二羟维生素 2.1 药液的配制
D3-24-羟化酶（又称 CYP24A1）的表达、维持体内 VD 水 根据《内外伤辨惑论》原文记载的组方药材用量“黄
平来降低骨钙蛋白（osteocalcin，又称BGP）的表达，从而 芪一两，当归二钱”（即两者质量比 5∶1）称取黄芪 60 g、
改善POF和OP [9－10] 。基于此，本研究通过建立POF并发 当归 12 g，混合，以水浸泡 1 h 后，煎煮 30 min×2 次；合
OP大鼠模型，拟从VD调控NETs的角度出发，探讨当归 并煎煮液，浓缩，得质量浓度为0.72 g/mL（以生药量计）
补血汤改善 POF 大鼠 OP 的作用机制，以期为当归补血 的当归补血汤药液。取骨化三醇胶囊内容物，以橄榄油
汤的临床应用提供参考。 为溶剂，制得质量浓度为0.025 μg/mL的骨化三醇药液，
1 材料 备用。取顺铂对照品适量，以生理盐水为溶剂，制得质
1.1 主要仪器 量浓度为1 mg/mL的顺铂溶液，备用。
本研究所用主要仪器包括 BX53 型正置显微镜（日 2.2 分组、造模与给药
本 Olympus 公司）、Multiskan MK3 型全自动酶标仪（美 将所有大鼠适应性喂养 7 d 后随机分为正常组、模
国 Thermo Fisher Scientific 公司）、DYCZ-24DN 型垂直 型组、骨化三醇组（0.1 μg/kg）及当归补血汤低、中、高剂
电泳槽（北京六一生物科技有限公司）、ChemiDoc 型化 量组（1.8、3.6、7.2 g/kg，以生药量计，剂量参考本课题组
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学发光凝胶成像仪（美国 Bio-Rad 公司）、RM 2016 型转 前期研究设置 ），每组 9 只。除正常组外，其余各组大
轮式切片机（德国Leica公司）等。 鼠均参考相关文献 的方法于第 1、8 天以 6 mg/kg 的剂
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1.2 主要药品与试剂 量腹腔注射顺铂溶液以建立POF并发OP模型。从造模
当 归 、黄 芪 饮 片（产 地 均 为 甘 肃 ，批 号 分 别 为 （顺铂首次注射时，下同）第5天开始，给予骨化三醇组及
20230301、20231101）均购自北京同仁堂贵阳药店有限 当归补血汤各剂量组大鼠灌胃相应药液，正常组及模型
公司，由贵州中医药大学基础医学院方剂学教研室蒋志 组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天1次，连续4周。

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