Page 74 - 《中国药房》2025年5期

2.4 回肠组织中肠功能指标的检测 结构完整；脓毒症组大鼠回肠组织绒毛排列紊乱，黏膜
取“2.3”项下各组大鼠的回肠组织，以5 000×g离心 下间质水肿及炎性浸润显著，组织破坏严重，Chiu’s 肠
10 min 进行匀浆，取上清液，用酶联免疫吸附法检测肠 黏膜损伤评分[（5.17±0.53）分]较假手术组（0分）显著升
道黏膜屏障功能指标DAO、D-乳酸及内毒素的水平。 高（P＜0.05）；与脓毒症组比较，马钱苷低、高剂量组和
2.5 回肠组织中ZO-1、Occludin的阳性表达检测 阳性对照组大鼠回肠组织的破坏程度得到缓解，组织水
取“2.3”项下各组大鼠的回肠组织切片，常规脱蜡并 肿及炎性浸润均明显减轻，Chiu’s肠黏膜损伤评分[分别
用梯度乙醇水合，用抗原修复溶液，冷却后，滴加山羊血 为（3.34±0.37）、（2.06±0.22）、（2.18±0.23）分]均显著
清封片，随后加入ZO-1、Occludin抗体（稀释比例分别为 降低（P＜0.05）；与马钱苷高剂量组比较，马钱苷高剂
1∶1 000、1∶2 000），在4 °C下孵育过夜；次日加入相应二 量+LPA 组大鼠回肠组织损伤加重，Chiu’s 肠黏膜损伤
抗（稀释比例为 1∶5 000），室温避光孵育 2 h 后，以 DAB 评分[（3.42±0.36）分]显著升高（P＜0.05）。结果见图1。
显色、苏木精再染色、梯度乙醇脱水、二甲苯透明和中性
树脂封片，用显微镜观察 ZO-1、Occludin 的阳性染色面
积。采用Image J软件计算阳性染色面积百分比。
2.6 回肠组织中RhoA、ROCK1的蛋白表达检测
取“2.3”项下各组大鼠的回肠组织，提取总蛋白，于 A.假手术组 B.脓毒症组 C.马钱苷低剂量组
98 ℃水浴中煮沸 10 min 进行变性，经电泳分离并湿法
转膜后加入脱脂牛奶，封闭过夜，次日加入 RhoA、
ROCK1、β-肌动蛋白（β-actin）抗体（稀释比例均为 1∶
1 000），在4 °C下孵育过夜；洗膜后，次日加入相应二抗
（稀释比例为1∶200），室温孵育1.5 h；使用Super ECL试 D.马钱苷高剂量组 E.阳性对照组 F.马钱苷高剂量+LPA组
注：黑色箭头指示炎性浸润。
剂盒呈色，采用凝胶成像系统和Image J软件分析，以目
图1 各组大鼠回肠组织病理学变化的显微图（苏木精
的蛋白与内参蛋白的灰度值比值表示目的蛋白的相对
和伊红染色）
表达水平。
2.7 统计学分析 3.3 马钱苷对大鼠回肠组织中 DAO、D-乳酸及内毒素
使用SPSS 27.0软件分析数据。符合正态分布的计 水平的影响
量资料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析， 与假手术组比较，脓毒症组大鼠回肠组织中 DAO、
组间两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。 D-乳酸及内毒素水平均显著升高（P＜0.05）；与脓毒症
3 结果 组比较，马钱苷低、高剂量组和阳性对照组大鼠回肠组
3.1 马钱苷对大鼠血清中 IL-6、TNF-α、IL-1β 水平的 织中DAO、D-乳酸及内毒素水平均显著降低，且马钱苷
影响 高剂量组显著低于马钱苷低剂量组（P＜0.05）；与马钱
与假手术组比较，脓毒症组大鼠血清中 IL-6、TNF- 苷高剂量组比较，马钱苷高剂量+LPA 组大鼠回肠组织
α、IL-1β 水平均显著升高（P＜0.05）；与脓毒症组比较， 中 DAO、D-乳酸及内毒素水平均显著升高（P＜0.05）。
马钱苷低、高剂量组和阳性对照组大鼠血清中 IL-6、 结果见表2。
TNF-α、IL-1β水平均显著降低（P＜0.05），且马钱苷高剂 表2 各组大鼠回肠组织中DAO、D-乳酸及内毒素水平
量组显著低于马钱苷低剂量组（P＜0.05）；与马钱苷高 比较（x±s，n＝10，pg/mL）
剂量组比较，马钱苷高剂量+LPA 组大鼠血清中 IL-6、 组别 DAO D-乳酸 内毒素
TNF-α、IL-1β水平均显著升高（P＜0.05）。结果见表1。 假手术组 67.85±6.82 578.36±58.06 51.06±5.19
脓毒症组 128.61±12.92 a 978.64±98.11 a 93.08±9.37 a
表 1 各组大鼠血清中 IL-6、TNF-α、IL-1β 水平比较
马钱苷低剂量组 90.05±9.08 b 764.37±76.57 b 70.54±7.10 b
（x±s，n＝10，pg/mL） 马钱苷高剂量组 69.05±7.08 bc 582.45±58.34 bc 52.16±5.31 bc
组别 IL-6 TNF-α IL-1β 阳性对照组 68.49±6.91 bc 586.27±58.76 bc 52.03±5.27 bc
假手术组 59.21±6.03 25.63±2.59 38.52±3.92 马钱苷高剂量+LPA组 89.76±9.06 d 759.86±76.02 d 69.86±7.06 d
脓毒症组 124.25±12.58 a 68.52±6.94 a 95.61±9.63 a a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与脓毒症组比较，P＜0.05；c：与马
马钱苷低剂量组 86.52±8.72 b 47.64±4.81 b 67.52±6.81 b 钱苷低剂量组比较，P＜0.05；d：与马钱苷高剂量组比较，P＜0.05。
马钱苷高剂量组 62.05±6.22 bc 26.85±2.73 bc 42.06±4.22 bc 3.4 马钱苷对大鼠回肠组织中 ZO-1、Occludin 阳性表
阳性对照组 61.34±6.19 bc 26.53±2.71 bc 42.75±4.31 bc
马钱苷高剂量+LPA组 87.15±8.76 d 48.06±4.83 d 66.85±6.71 d 达的影响
a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与脓毒症组比较，P＜0.05；c：与马 与假手术组比较，脓毒症组大鼠回肠组织中 ZO-1、
钱苷低剂量组比较，P＜0.05；d：与马钱苷高剂量组比较，P＜0.05。 Occludin阳性染色面积百分比均显著降低（P＜0.05）；与
3.2 马钱苷对大鼠回肠组织病理学的影响 脓毒症组比较，马钱苷低、高剂量组和阳性对照组大鼠
假手术组大鼠回肠组织无坏死、水肿等现象，组织 回肠组织中ZO-1、Occludin阳性染色面积百分比均显著

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