Page 73 - 《中国药房》2025年3期
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and apoptosis of uterine fibroid cells.
          KEYWORDS    gossypol acetic acid； uterine fibroids； proteomics； bioinformatics； mechanism



              子宫肌瘤（uterine fibroid，UF）是女性子宫平滑肌形             （epidermal  growth  factor  receptor  feedback  inhibitor  1，
          成的良性肿瘤，在育龄妇女中的发病率为20%～50% ，                        ERRFI1）抗体、鼠源 GAPDH 抗体（货号分别为 26902-1-
                                                       [1]
          其致病因素复杂，受年龄、种族、激素、生活方式、家族                          AP、11630-1-AP、60004-1-Ig）均购自美国 Proteintech 公
                           [2]
          史、遗传因素等影响 。相比手术的有创性，药物保守治                          司；兔源CXC趋化因子配体3（CXC chemokine ligand 3，
          疗是大多数 UF 患者更倾向的治疗方式，常用治疗药物                         CXCL3）抗体（货号 DF8554）购自美国 Affinity 公司；辣
          包括激素和中药，但是激素只能暂时缓解症状，一旦停                           根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G、山羊抗鼠
          药，肌瘤可能会再次生长，且长期使用激素可能会引起                           免疫球蛋白 G 二抗（货号分别为 111-035-003、115-035-
          一系列的副作用；中药治疗效果因人而异，且需要较长                           003）购自美国Jackson公司。
                                      [3]
          时间的治疗才能看到明显的效果 。因此，选择安全有                           1.3 细胞
          效的治疗药物对UF具有重要意义。                                       人 UF 细胞 SK-UT-1（货号 CTCC-007-0320）购自浙
              醋酸棉酚（gossypol acetic acid，GAA）是一种多元酚           江美森细胞科技有限公司；人子宫内膜细胞 EEC（货号
          醛类化合物，也是复方醋酸棉酚片的主要药效成分。相                           QS-H011）购自旗赛生物科技（武汉）有限公司。
          关研究显示，复方醋酸棉酚片在治疗UF、子宫内膜异位                          2 方法
          症等方面具有较好的效果           [4―5] ，但关于GAA在UF中的调          2.1 细胞增殖活性考察
          控作用及机制尚不清楚。蛋白组学能够从细胞水平对                                取正常培养的 SK-UT-1 细胞，吸去原培养液，加入
          蛋白质的组成进行分析，明确整个过程的变化规律及特                           磷酸盐缓冲液（PBS）洗后加入胰蛋白酶消化3 min后终
          征，可用于全面、定量描述蛋白质的表达及其在疾病或                           止消化，以1 000 r/min离心5 min，细胞沉淀用培养基重
                              [6]
          药物治疗影响下的变化 。基于此，本研究通过体外细                           悬；取 20 μL 细胞悬液加入 20 μL 台盼蓝进行计数，以
          胞实验，观察GAA对人UF细胞SK-UT-1增殖的调控作                       8 000 个/孔进行铺板（96 孔板），细胞体积 100 μL；然后
          用，然后结合四维数据非依赖型采集（4D-DIA）蛋白组                        分为不同质量浓度（5、10、20、40、80、160 μmol/L，浓度
          学技术挖掘差异蛋白并进行验证，以期为阐明 GAA 治                         根据文献[7]设置）GAA组、对照组（含有细胞）和空白组
          疗UF的作用机制提供参考。                                     （不含细胞），每组设置3个复孔，于5%CO2、37 ℃条件下
          1 主要材料                                             培养 24 h。各孔加入 10 μL CCK8 继续培养 3 h，采用酶
          1.1 主要仪器                                           标仪测定各孔光密度（optical density，OD）值，并计算细
              本研究所用主要仪器有 CKX53 型倒置显微镜（日                      胞存活率，细胞存活率（%）＝（给药组 OD 值－空白组
          本Olympus公司），DYY-7C型电泳仪、DYCZ-24DN型垂                 OD值）/（对照组OD值－空白组OD值）×100%。
          直电泳槽、DYCZ-40 型电转仪（北京六一生物科技有限                       2.2 4D-DIA蛋白组学分析
          公司），ChemiDoc  XRS+型凝胶成像系统（美国 Bio-                     “2.1”项下实验结束后，向对照组、GAA组（80 μmol/L）
                         TM
          Rad 公司），ViiA 7 型实时荧光定量聚合酶链式反应仪                     中加入含 1 mmol/L RIPA 裂解缓冲液，冰上孵育 5 min；
         （美国 ABI 公司），Multiskan FC 型酶标仪、EASY-nLC              超声 5 min，以 15 000 r/min 离心 10 min，收集上清液，采
          1200型质谱系统、Orbitrap Exploris 480型高效液相色谱             用 BCA 法测定总蛋白浓度。取上述蛋白溶液，在 37 ℃
          仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）。                   下用 10 mmol/L 二硫苏糖醇还原 45 min，用 50 mmol/L
          1.2 主要药品与试剂                                        碘乙酰胺烷基化 15 min；加入 4 倍体积的预冷丙酮，在
              CCK-8检测试剂盒（货号CK04）购自日本同仁化学                     －20 ℃下沉淀 2 h，离心，在 37 ℃下用胰蛋白酶消化过
          研究所；GAA（纯度≥98.0%，货号 A506218-0001）购自                夜。终止消化后，将样品在C18色谱柱上脱盐，真空浓缩
          生工生物工程（上海）股份有限公司；米非司酮（货号HY-                        后，用0.1%甲酸溶解，待上机检测。
          13683，纯度99.83%）购自美国MCE公司；RIPA裂解液、                      采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法检测。将上
          BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号分别为P0013B、P0010）                    述待测样品上样到分析柱 IonOpticks Australia（25 cm×
          均购自上海碧云天生物技术股份有限公司；兔源N-myc                         75 μm，1.6 μm）中进行分离；流动相A相为0.1%甲酸溶
          下游调节基因 1（N-myc downstream regulated gene 1，        液，B 相为乙腈溶液（含 0.1% 甲酸），梯度洗脱（0～25
          NDRG1）抗体、兔源表皮生长因子受体反馈抑制剂 1                         min，2%B→22%B；25～30  min，22%B→35%B；30～35


          中国药房  2025年第36卷第3期                                                 China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 3    · 319 ·
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