Page 63 - 《中国药房》2025年3期

except the number of autophagic vacuoles increased significantly （P＜0.05）. Compared with the H-GLA group， the GLA+
Compound C group showed aggravated cartilage tissue of joint cartilage injury and inflammatory cell infiltration in rats， and the
above quantitative indicators were reversed significantly （P＜0.05）. CONCLUSIONS GLA can promote autophagy and inhibit
apoptosis of chondrocytes in KOA rats， the mechanism of which may be associated with activating AMPK/mTOR/ULK1 signaling
pathway.
KEYWORDS galangin； knee osteoarthritis； chondrocytes； autophagy； apoptosis； AMPK/mTOR/ULK1 signaling pathway

膝关节炎（knee osteoarthritis，KOA）是临床上常见 照品（批号 orb1909567，纯度≥98%）购自武汉博欧特生
的一种慢性退行性疾病，以关节疼痛、畸形和功能障碍 物科技有限公司；苏木素-伊红（HE）染色试剂盒（批号
为特征，其进展缓慢，最终因疼痛和关节运动受损而导 G1120-10）购自北京祥生兴业科技有限公司；基质金属
致患者活动能力丧失 。我国KOA的患病率为25.51%， 蛋白酶 13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13）、白细
[1]
且随着人口老龄化加剧和平均预期寿命延长，KOA的患 胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）酶联免疫吸附测定
[2]
病率将进一步上升 。目前，KOA患者的治疗以口服非 （ELISA）试剂盒（批号分别为F16182、F15810）购自上海
甾体抗炎药为主，严重者需要进行全关节置换术来恢复 西 唐 生 物 科 技 有 限 公 司 ；自 噬 检 测 试 剂 盒（批 号
关节功能；然而，药物只能暂时缓解症状，而手术是一种 A486454）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；An‐
[3]
危险且昂贵的选择，效果有限 ，加之学界对 KOA 的病 nexin Ⅴ-FITC/PI 凋亡检测试剂盒（批号 JC-A80300）购
因认识有限，因此有必要进一步阐明该病的生理病理， 自上海机纯实业有限公司；BCA 蛋白定量试剂盒、ECL
并开发新的治疗手段。 试剂盒（批号分别为 KL-X126、KL-X122）购自上海康朗
在细胞饥饿状态下，腺苷一磷酸活化的蛋白质激酶 生物科技有限公司；兔源 β-肌动蛋白（β-actin）、磷酸化
（adenosine monophosphate-activated protein kinase， AMPK（phosphorylated AMPK，p-AMPK）、AMPK、磷酸
AMPK）可通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mamma‐ 化 mTOR（phosphorylated mTOR，p-mTOR）、mTOR、磷
lian target of rapamycin，mTOR）来激活UNC-51样激酶1 酸化ULK1（phosphorylated ULK1，p-ULK1）、ULK1抗体
（UNC-51-like kinase 1，ULK1），从而触发软骨细胞自噬 和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗（批号分别为
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抑制细胞凋亡，参与调控KOA的疾病进展 。高良姜素 ab181095、ab68206、ab271188、ab137133、ab32028、
（galangin，GLA）是一种重要的具有天然活性的类黄酮， ab133766、ab177472、ab6721）购自英国Abcam公司。
具有抗炎、抗菌、抗氧化应激、抗纤维化、抗高血压等生 1.3 实验动物
物活性，对类风湿性关节炎、骨关节炎（osteoarthritis， 本研究所用动物为雄性SD大鼠，体重250～300 g，
[5]
OA）、骨质疏松症等疾病具有较好的疗效 。相关研究 购于武汉有度生物科技有限公司，动物生产许可证号为
显示，GLA 可通过调控 AMPK/mTOR 信号通路，促进细 SCXK（鄂）2021-0025。所有大鼠均置于温度 24 ℃、湿
[6]
胞自噬，抑制细胞凋亡，从而减轻镉诱导的肾毒性 。然 度55%、12 h光/暗循环的环境中自由进食和饮水。本实
而，GLA在KOA中的作用机制尚不清楚。基于此，本研 验经武汉有度生物科技有限公司动物伦理委员会审批
究通过探讨 GLA 调节 AMPK/mTOR/ULK1 信号通路对 （批件号2242930）。
KOA 大鼠软骨细胞自噬和凋亡的影响，以期为 KOA 的 2 方法
临床治疗提供参考。 2.1 动物造模、分组与给药
1 材料 将 56 只大鼠采用 0.3% 戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，
1.1 主要仪器 于右后肢膝关节腔内侧切口后暴露关节腔，之后横切前
Talos F200X S 型 透 射 电 子 显 微 镜（transmission 交叉韧带，切除内侧半月板，然后将髌骨复位，缝合内侧
electron microscope，TEM）购自北京欧波同光学技术有 囊切口，闭合皮肤。6 周后，对大鼠进行 X 射线检查，若
限公司；MACSQuant VYB型流式细胞仪购自德国美天 显示关节面粗糙变形，边缘有明显骨赘，内侧间隙变窄，
®
旎生物技术有限公司； LK-YG96 型倒置显微镜购自天 软骨下骨的骨密度明显增高，则说明 KOA 模型构建成
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津徕科光学仪器有限公司；SH-523型凝胶成像系统购自 功 。另选择10只正常饲养的大鼠打开关节腔，但保持
杭州申花科技有限公司。 半月板完整，作为假手术组（即Sham组）。
1.2 主要试剂与仪器 将建模成功的大鼠分为模型组（即 KOA 组），GLA
GLA对照品（批号ES-1114S，纯度≥99%）购自上海 低、中、高剂量组（即L-GLA、M-GLA、H-GLA组，皮下注
[8]
玉博生物科技有限公司；AMPK 抑制剂 Compound C 对 射100、200、400 μg/kg的GLA ，临用时以二甲基亚砜溶

中国药房 2025年第36卷第3期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 3 · 313 ·