Page 54 - 《中国药房》2025年3期

号峰、6 号峰、16 号峰、23 号峰（大黄素）、21 号峰（大黄 3 讨论
酸）、24号峰（甘草次酸）、10号峰、11号峰、20号峰（甘草 在供试品溶液的制备过程中，本研究考察了不同提
酸铵）、19 号峰（芦荟大黄素）。这些色谱峰所对应的成 取溶剂（甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、乙醇、30%
分被认为是影响精天颗粒批次间差异的主要化学成分， 乙醇、50% 乙醇、70% 乙醇）、不同溶剂体积（10、20、50、
即潜在的差异标志物。进一步分析显示，这些差异标志 100 mL）、不同超声时间（15、30、45 min）对提取结果的
物中，1个来自猪苓，1个来自穿山龙，3个来自炙甘草，5 影响，最终选择了以 20 mL 甲醇作为提取溶剂，超声提
个来自红景天，7个来自熟大黄（因6、7号色谱峰的来源 取 30 min 的供试品溶液制备方法。在色谱条件的优化
饮片有多个，故此处合计值大于13），说明严格控制熟大 方面，本研究对流动相（甲醇-0.2%磷酸溶液、乙腈-0.2%
黄、红景天、炙甘草、穿山龙、猪苓饮片的质量是确保精 磷酸溶液、甲醇-水、乙腈-水）、柱温（30、35、40 ℃）、进样

天颗粒批次间质量稳定的关键。在载荷散点图中，距离 量（1、3、5 μL）进 行 了 考 察 ，最 终 确 定 流 动 相 为 乙
原点越远的成分对样品分类的影响越大。由图 5D 可 腈-0.2%磷酸溶液，柱温为30 ℃，进样量为1 μL；用二极
知，上述 13 个色谱峰均远离原点，与图 5C 结果一致，进 管阵列检测器进行全波长（190～400 nm）扫描，发现在
一步证实了上述 13 个成分可能是导致样品批次间差异 265 nm 波长下，供试品溶液的响应信号较强且基线稳
的主要标志性成分。 定，并能检测出包含 190～400 nm 波长范围内的绝大部
R 2 ＝（0，0.425），Q 2 ＝（0，－0.563） 分色谱峰，故确定检测波长为265 nm。
R 2
Q 2
0.5 本研究建立了13批精天颗粒的UPLC指纹图谱，利
0 用混合对照品溶液确认了 10 个特征峰的归属，指认出
－0.5
25个共有峰，并对这些共有峰进行了饮片归属。研究结
－1.0
果表明，13 个不同批次样品在化学成分上的一致性较
－1.5
－2.0 好。在对13批精天颗粒进行指纹图谱分析时，发现其相
－0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
A.置换检验图 似度较高（0.955～0.996），表明样品所采用的制备工艺
1
2 和样品质量较为稳定。HCA结果显示，当平方欧氏距离
6 3
4 2 为 15 时，样品 S1～S10 被划分为 3 个不同的类别，这可
1.005 09*t[2] －2 0 能与不同批次饮片的产地和质量差异有关；样品 S11～

S13 是采用相同批次的饮片在相同生产条件下制备的，
－4
－6 当平方欧氏距离为5时，它们被单独聚为一类，说明在保
－8
－10 －8 －6 －4 －2 0 2 4 6 8 证饮片质量、生产条件一致的前提下，制剂质量较为一
1.009 69*t[1]
B.得分图 致。PCA和OPLS-DA的进一步分析结果揭示了多种成
分的含量差异，这些成分主要来源于酒黄精、红景天、熟
2.5
2.0 大黄、炙甘草、桂枝、穿山龙和猪苓，故需要严格控制上
1.5 述饮片的质量。HCA是一种非监督学习方法，其基于不
VIP值 1.0 同样本之间的相似性进行分组，不依赖于预先定义的类
0.5
0 别标签；而OPLS-DA是一种有监督的判别分析方法，旨
－0.5
在通过最大化组间差异和最小化组内差异来识别不同
－1.0
25 13 17 7 6 16 23 21 24 10 11 20 19 2 1 5 9 18 8 3 12 14 22 4 15 组别之间的差异化合物。上述2种方法在算法设计和目
峰号
C. VIP排序图 的上存在本质区别，这可能是导致本研究中二者分组结
X
0.3 Y 果不一致的原因。
0.2 此外，鉴于所建立的指纹图谱与茯苓、猪苓、泽泻、
0.884 027*pq[2] －0.1 0 穿山龙图谱对应的共有峰数目较少，本研究还对文献报
0.1
[8]
[9]
道的茯苓中的活性成分茯苓酸 ，猪苓中的麦角甾醇 ，
－0.2
[10]
－0.3 泽泻中的 23-乙酰泽泻醇 B、23-乙酰泽泻醇 C ，穿山龙
－0.4 [11]
－0.3 －0.2 －0.1 0 0.1 0.2 0.3 中的薯蓣皂苷 等成分进行了比对，但可能出于色谱柱
0.888 786*pq[1]
D.载荷散点图 不匹配、化学成分在样品制备过程中发生转化或者含量
图5 13批精天颗粒的OPLS-DA图 低于仪器的检测限无法被检出等原因，上述成分均不能
· 304 · China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 3 中国药房 2025年第36卷第3期