Page 65 - 《中国药房》2025年1期
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（alanine transaminase，ALT）及天冬氨酸转氨酶（aspar‐           2.2 分组、造模与给药
          tate  transaminase，AST）]，空 腹 胰 岛 素（fasting  insulin，   取雄性SD大鼠60只，适应性饲养1周后，测量大鼠
          FINS）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒，以及丙二醛                      体重及 FBG 并据此分为对照组（12 只）和造模组（48
         （malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide            只）。造模组大鼠给予高脂饲料连续喂养 4 周后以 25
          dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）试剂盒            mg/kg 的剂量一次性尾静脉注射 1% 链脲佐菌素溶液以
         （批号分别为20230131、20230218、20230129、20230221、          复制T2DM IR大鼠模型；3 d后，禁食、不禁水12 h，检测
          20230315、20230521、20221020、20221024、20220804）均     大鼠 FBG 水平，若 FBG≥11.7 mmol/L 表示 T2DM IR 大
          购 自 南 京 建 成 科 技 有 限 公 司 ；ROC 试 剂 盒（批 号                            [12]
                                                             鼠模型复制成功 。对照组大鼠以基础饲料喂养 4 周
          MA0219）购自大连美仑生物技术有限公司；鼠源谷胱甘
                                                             后，一次性尾静脉注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
          肽过氧化物酶 4（glutathione peroxidase 4，GPX4）抗体、
                                                             依据体重及FBG将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄
          鼠源铁蛋白重链1（ferritin heavy chain 1，FTH1）抗体、鼠
                                                             芪-葛根配伍组（QG 组）、铁死亡抑制剂组（Fer-1 组）、黄
          源长链脂酰辅酶A合成酶4（long-chain acyl-CoA synthe‐
                                                             芪-葛根配伍+铁死亡诱导剂组（QG+erastin组），每组12
          tase 4，ACSL4）抗体、鼠源 β-肌动蛋白（β-actin）抗体（内
                                                             只。对照组大鼠给予等体积生理盐水灌胃，自由饮水，
          参）、兔源线粒体铁蛋白（ferritin mitochondrial，FTMT）抗
                                                             基础饲料喂养，腹腔注射等体积生理盐水；模型组大鼠
          体、兔源胱氨酸/谷氨酸反向转运蛋白（cystine/glutamate
                                                             给予等体积生理盐水灌胃，自由饮水，高脂饲料喂养，腹
          anti-porter，xCT）抗体、兔源ACSL3抗体和辣根过氧化物
          酶标记的羊抗兔、羊抗鼠IgG二抗（货号分别为67763-1-                     腔注射等体积生理盐水；QG 组大鼠按 4.05 g/（kg·d）的
          Ig、68068-1-Ig、66617-1-Ig、66009-1-Ig、10727-1-AP、    剂量灌胃黄芪葛根水煎液，同时以高脂饲料喂养，自由
          DF10202、20710-1-AP、SA00002-1、SA00002-2）均购自         饮水，腹腔注射等体积生理盐水；Fer-1 组大鼠灌胃等
          美 国 Proteintech 公 司 ；BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒（批 号         体积生理盐水，并腹腔注射 Fer-1 5 mg/kg           [13―14] ，隔日 1
          20220820）购自北京兰杰柯科技有限公司；烟酰胺腺嘌                       次，同时以高脂饲料喂养，自由饮水；QG+erastin 组大鼠
                              +
          呤二核苷酸磷酸（NADP ）/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷                        按 4.05 g/（kg·d）的剂量灌胃黄芪-葛根水煎液，并腹腔
                             2+
          酸磷酸（NADPH）、Fe 、Fe 检测试剂盒（批号分别为                      注射erastin 10 mg/（kg·d） ，同时以高脂饲料喂养，自由
                                                                                   [15]
          20230531、20230521、20230531）均购自苏州格锐思生物              饮水。灌胃及腹腔注射体积均为 10 mL/kg，连续干预 4
          科技有限公司。                                            周。实验过程中共有 14 只大鼠死亡，其中模型组 4 只、
          1.3 实验动物与饲料                                        QG组3只、Fer-1组2只、QG+erastin组5只。
              雄性 SPF 级 SD 大鼠 60 只，体重（160±20） g，由江            2.3 大鼠一般情况观察
          西中医药大学实验动物科技中心提供，动物生产许可证                               每天更换垫料前观察大鼠的一般状态，包括大鼠的
          号为 SCXK（赣）2023-0001。大鼠架笼饲养，自然采光，
                                                             毛色、精神状态、反应力，并记录大鼠的饮水量及尿
          实验室通风良好，温度、湿度适宜。实验饲料（普通饲料
                                                             量等。
          和高脂饲料）由江西中医药大学实验动物科技中心提
                                                             2.4 大鼠血清、组织采集与留存
          供。本实验方案经江西中医药大学实验动物伦理委员
                                                                 末次干预结束后，禁食、不禁水 12 h，麻醉大鼠，于
          会审核，编号为20230306030。
                                                             腹主动脉取血。血样静置后于 4 ℃下以 3 000 r/min 离
          2 方法
                                                             心 10 min，分离血清，于－20 ℃下保存，备用。取血后，
          2.1 实验药物及制备
                                                             迅速打开大鼠腹腔，充分暴露肝脏组织，快速取出，剪取
              依据黄芪葛根汤原方剂量、古今度量衡、2020 年版
                                                             相同部位肝脏组织，洗净，吸干。一部分肝脏组织固定
                                                    [11]
         《中国药典》（一部）所载黄芪参考用量及文献报道 ，本
                                                             于多聚甲醛溶液中，待后续行苏木精-伊红（hematoxylin-
          实验参考成人日服黄芪 30 g、葛根 15 g 的剂量，并依据
                                                             eosin，HE）染色；剩余肝脏组织于－80 ℃下冻存，用于后
         《人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表》中人
                                                             续相关指标及蛋白检测。
          与大鼠体表面积换算系数（6.3），计算得到黄芪葛根配伍
          大鼠等效给药剂量为 4.05 g/（kg·d）（以生药总量计）。                   2.5 大鼠FBG及生化指标检测
          黄芪、葛根以质量比2∶1配取后，加10倍量水，浸泡0.5 h，                        药物干预前及干预后使用血糖仪对各组大鼠尾尖
          武火快速煮沸后转文火煎煮 30 min，过滤；药渣按上述                       采血，检测 FBG 水平；取“2.4”项下各组大鼠的血清样
          方法重复提取1次，过滤；合并2次滤液，蒸发浓缩，得质                         品，严格按照相应试剂盒说明书方法操作，使用微板法
          量浓度为 0.405 g/mL（以生药总量计）的黄芪-葛根水煎                    检测各组大鼠血清中 TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平，使
          液，于4 ℃下保存，备用。                                      用全自动生化分析仪检测AST、ALT水平。


          中国药房  2025年第36卷第1期                                                  China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 1    · 59 ·
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