Page 53 - 《中国药房》2024年24期

AMPKα and MIF in myocardial tissue were significantly increased or upregulated （P＜0.05）. However， myocardial tissue lesions
of mice in the I/R+ISO-1 group worsened， with most quantitative indicators significantly deteriorating （P＜0.05）； MIF inhibitor
could generally reverse the protective effect of PHC on I/R mice （P＜0.05）. CONCLUSIONS PHC can improve cardiac function，
reduce myocardial inflammation， and restore the ultrastructure of myocardial tissue in I/R mice. These effects may be related to the
activation of the MIF/AMPK signaling pathway.
KEYWORDS penehyclidine hydrochloride； myocardial ischemia-reperfusion； inflammatory response； MIF/AMPK signaling
pathway

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是 成像系统、680型酶标仪（美国Bio-Rad公司），DM500型
临床常见的缺血性心脏病（ischemic heart disease，IHD）， 电子显微镜（德国Leica公司）等。
及时、有效的血运重建是改善 AMI 患者预后的重要策 1.2 主要药品与试剂
[1]
略 。 但 血 运 重 建 后 的 心 肌 缺 血 再 灌 注（ischemia- PHC 注射液（批号 20211003，规格 1 mL∶0.5 mg）购
reperfusion，I/R）可能对心肌造成一定损伤，且 I/R 损伤 自锦州奥鸿药业有限责任公司；MIF抑制剂4，5-二氢-3-
的发生与患者并发症发生率及死亡率的升高密切 （4-羟基苯基）-5-异噁唑乙酸甲酯（简称“ISO-1”）的原料
相关 [2―4] 。 药（货号YZM018877，纯度99%）购自范德（北京）生物科
盐酸戊乙奎醚（penehyclidine hydrochloride，PHC） 技有限责任公司；兔源B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma-
是一种新型选择性抗胆碱能药物，可选择性作用于毒蕈 2，Bcl-2）抗 体（货 号 ab59348）、兔 源 MIF 抗 体（货 号
碱型乙酰胆碱受体（muscarinic acetylcholine receptor， ab65869）、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫
mAChR），目前已被用于麻醉前干预、有机磷农药中毒 球蛋白G二抗（货号ab205718）、HRP标记的山羊抗鼠免
救治、休克应急处理等多个临床领域 [5―7] 。研究显示， 疫球蛋白 G 二抗（货号 ab205719）均购自英国 Abcam 公
PHC可通过稳定细胞膜、溶酶体、线粒体膜结构，减少溶 司 ；兔 源 磷 酸 化 AMPKα（phosphorylated AMPKα，p-
酶体的释放，抑制花生四烯酸产物和休克因子的生成， AMPKα）抗 体（货 号 2535S）购 自 美 国 Cell Signaling
从而发挥细胞保护作用；此外，PHC 还可降低毛细血管 Technology 公司；鼠源 β-肌动蛋白（β-actin）抗体（货号
壁通透性，减少炎症性渗出 [8―9] 。体内实验证实，PHC能 100166-MM10）购自北京义翘神州科技股份有限公司；
够通过降低血液黏度和纤维蛋白原水平、增加红细胞变 血清白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-10、肿瘤坏死
形能力、抑制血栓素 A（thromboxane A，TXA）合成和血 因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶联免疫吸附测
小板聚集等多种途径来改善急性呼吸窘迫综合征模型 定（ELISA）试 剂 盒（货 号 分 别 为 70-EK206/3-96、70-
大鼠的微循环 。巨噬细胞移动抑制因子（macrophage EK210/4-96、70-EK282/3-96）均购自杭州联科生物技术
[10]
migration inhibitory factor，MIF）是一种在心肌细胞和血 有限公司。
管内皮细胞中表达的多效免疫调节因子，可调节炎症细 1.3 实验动物
胞的活化和多种促炎性细胞因子的释放，并可通过激活 40 只健康雄性 SPF 级 C57BL/6 小鼠，体重 18～20
下 游 腺 苷 一 磷 酸 活 化 的 蛋 白 激 酶（adenosine g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产
monophosphate-activated protein kinase，AMPK）来保护 许可证号为 SCXK（京）2022-0052。所有动物均饲养于
心脏免受 I/R 损伤 [11―12] 。已有研究证实，PHC 可抑制线 温度20～26 ℃、相对湿度40%～70%、每12 h光照/黑暗
粒体调控的凋亡通路，改善 I/R 所致的大鼠心肌损 循环的环境中，自由进食、饮水。本研究方案经我院医
伤 [13―14] ，但其能否影响 MIF/AMPK 信号通路尚不清楚。 学伦理委员会审核批准（项目编号K2022097）。
为此，本研究通过结扎左冠状动脉构建小鼠心肌 I/R 损 2 方法
伤模型，基于 MIF/AMPK 信号通路初步探讨 PHC 的心 2.1 造模、分组与给药
肌保护作用及潜在机制，以期为阐明其具体作用机制及 小鼠经适应性喂养1周后，按随机数字表法分为假手
后续开发应用提供理论依据。 术组、I/R组、I/R+PHC组、I/R+ISO-1组、I/R+PHC+ISO-1
1 材料 组，每组8只。除假手术组外，其余各组小鼠均参考相关
1.1 主要仪器 文献 [12―13，15] 以冠状动脉结扎法制备I/R损伤模型：小鼠经
本研究所用主要仪器包括 Vevo 770 型高分辨率小 腹腔注射1%戊巴比妥钠（60 mg/kg）麻醉后行气管插管
动物超声影像系统（加拿大Visual Sonics公司），E200型 并连接动物呼吸机控制通气（呼吸频率90～110次/min，
生物显微镜（日本 Nikon 公司），ChemiDoc XRS+型凝胶 潮气量0.3～0.4 mL）；于胸骨左侧切开，钝性分离至心包

中国药房 2024年第35卷第24期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 24 · 3011 ·