Page 15 - 《中国药房》2024年22期
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阳还五汤由黄芪、归尾、赤芍、地龙、川芎、桃仁、红花7味                        1.3 动物与饲料
          中药组成，是益气活血的代表方，具有补气活血、通经活                              本研究所用动物为SPF级雄性C57BL/6小鼠，共80
          络的作用，主治中风之气虚血瘀证。临床和实验研究表                           只，体重（17.7±0.4）g，购自辽宁长生生物技术股份有限
          明，补阳还五汤可改善高脂血症患者的血脂异常，有效                           公司，实验动物许可证号为SCXK（辽）2020-0001。小鼠
          降低血脂水平      [8―9] 。基于此，本研究探讨了补阳还五汤                 购入后，适应性饲养 7 d，自由摄食、饮水。高脂饲料
          对高脂血症模型小鼠红细胞形态及红细胞膜相关蛋白                           （65% 维持料+10% 猪油+15% 糖+5% 奶粉+5% 蛋黄粉）
          表达的影响，为揭示补阳还五汤改善高脂血症的作用机                           和基础饲料分别由沈阳市于洪区前民动物实验饲料厂、
          制提供实验依据。                                           辽宁长生生物技术股份有限公司提供。本实验经黑龙
          1 材料                                               江中医药大学实验动物伦理委员会审核批准，伦理审查
          1.1 主要仪器                                           批号为2024032906。
              本研究所用主要仪器包括Ⅸ73 型研究级倒置显微                        2 方法
          镜（日本 Olympus 公司），Infinite 200 PRO 型酶标仪（瑞           2.1 补阳还五汤药液的制备
          士 Tecan公司），XS500i型全自动血液细胞分析仪（日本                        取黄芪120 g、归尾6 g、赤芍5 g、地龙3 g、川芎3 g、
          Sysmex 公司），7600-020 型全自动生化分析仪、HT7700               桃仁3 g、红花3 g，混匀，加10倍量水浸泡1 h，煮沸后以
          型透射电子显微镜（日本 Hitachi 公司），HYQ-2121A 型                小火煎煮90 min，过滤，再加入10倍量水，煮沸后以小火
                                                             煎煮1 h，过滤，合并滤液，浓缩制得0.93 g/mL（以生药量
          涡旋器（美国Crystal Instruments公司），MIKRO 220R型
          低温高速离心机（德国 Hettich 公司），Amersham Imager             计）的药液，于4 ℃下储存，备用。
                                                             2.2 造模、分组与给药
          600型凝胶成像系统（美国General Electric公司）等。
                                                                 随机抽取 15 只小鼠作为正常组，用基础饲料喂养；
          1.2 主要药品与试剂
                                                             其余65只小鼠作为造模组，用高脂饲料喂养。所有小鼠
              黄芪、归尾、赤芍、地龙、川芎、桃仁、红花饮片（批号
                                                             均自由摄食饮水，每周称定体重。喂养10周后，分别在
          分 别 为 220101-X、231201、20220902、230801、230301、
                                                             正常组与造模组中随机选取 5 只小鼠，检测 TC、TAG、
          240301、20230801）均购自黑龙江中医药大学附属第一
                                                             HDL-C、LDL-C水平，若血脂异常，则提示高脂血症模型
          医院，经黑龙江中医药大学药学院吴军凯副教授鉴定，
                                                             造模成功 。
                                                                     [10]
          均为真品。阿托伐他汀钙片（批号 AA2212006，规格 10
                                                                 将60只造模成功的小鼠随机分为模型组、阿托伐他
          mg）购自北京嘉林药业股份有限公司；非诺贝特胶囊（批
                                                             汀钙组（0.26 g/kg）、非诺贝特组（1.3 mg/kg）和补阳还五
          号 34891，规格 200 mg）购自法国 Recipharm Fontaine 公        汤高、中、低剂量组（18.6、9.3、4.6 g/kg），每组 10 只。按
          司；BCA 蛋白浓度测定试剂盒（批号 MA0082-2-Nov-
                                                             照成人临床常用剂量换算小鼠给药剂量，以水为溶剂配
          021）购自大连博格林生物科技有限公司；总胆固醇（to‐
                                                             制药液。阿托伐他汀钙组小鼠灌胃阿托伐他汀钙 0.26
          tal  cholesterol，TC）、葡 萄 糖 、甘 油 三 酯（triglyceride，
                                                             g/kg，非诺贝特组小鼠灌胃非诺贝特 1.3 mg/kg，补阳还
          TAG）、低 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇（low-density  lipoprotein    五汤高剂量组小鼠灌胃补阳还五汤药液18.6 g/kg，补阳
          cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density
                                                             还五汤中、低剂量组小鼠按成人临床常用剂量的2、4倍
          lipoprotein cholesterol，HDL-C）测定试剂盒（批号分别为
                                                             稀释液灌胃补阳还五汤药液9.3、4.6 g/kg，给药体积均为
          222081、223811、228111、231871、231841）均购自中生北          20 mL/kg，正常组和模型组小鼠灌胃等体积蒸馏水，每
          控生物科技股份有限公司；罗丹明标记的鬼笔环肽（批
                                                             日1次，连续21 d。给药期间，正常组小鼠继续用普通饲
          号 T8716150）购自翌圣生物科技（上海）股份有限公司；                     料喂养，其他组小鼠继续用高脂饲料喂养。
          兔源 β-肌动蛋白（β-actin）、葡萄糖转运蛋白 1（glucose               2.3 小鼠血液样品采集
          transporter type 1，GLUT1）、红细胞膜蛋白带 4.2（eryth‐           末次给药前，小鼠禁食不禁水12 h，称体重；末次给
          rocyte membrane protein band 4.2，protein 4.2）、小窝蛋白1  药 1 h 后，从小鼠两侧眼底静脉丛取血，分别用枸橼酸
         （caveolin-1）抗体（批号分别为AH11286402、BC11096713、          钠、肝素钠抗凝，备用，采血后通过颈椎脱臼处死小鼠。
          BC05252396、BB04011854）及辣根过氧化物酶标记的羊                 2.4 小鼠红细胞膜的制备
          抗兔免疫球蛋白 G（immunoglobulin G，IgG）二抗（批号                   取“2.3”项下每组 6 只小鼠的以枸橼酸钠抗凝的血
          BA12163708）均购自北京博奥森生物技术有限公司；兔                      样，以3 000 r/min离心10 min，弃上清液，加入适量生理
          源筏蛋白 1（flotillin-1）抗体（批号 01）购自美国 Bimake            盐水，再以3 000 r/min离心10 min，弃上清液，重复洗涤
          公司；Tris-Glycine 蛋白电泳液、Tris-Glycine 转膜缓冲液           2次，得到干净的红细胞；加入预冷的低渗Tris-盐酸溶液
         （批号分别为 01437/29623、01438/00224）均购自江苏康               和蛋白酶抑制剂对苯甲磺酰氟，超声处理后置于4 ℃冰
          为世纪生物科技股份有限公司；飞克特超敏ECL发光液                          箱过夜，使其充分溶血。取红细胞溶血液，以 14 000
         （批号 MA0186-1-Sep-26l）购自大连美仑生物技术有限                   r/min 离心 12 min，弃上清液，加入适量蒸馏水，再以
          公司。                                                14 000 r/min 离心 8 min，重复洗涤 2 次，得到乳白色膜，


          中国药房  2024年第35卷第22期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 22    · 2717 ·
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