Page 81 - 《中国药房》2024年21期

Bioinformatics analysis showed that MTRR protein mainly works in conjunction with 10 proteins， including MMAA， and was
involved in various biological processes such as sulfur amino acid biosynthesis. CONCLUSIONS The MTRR rs10380 CC genotype
may be a risk factor for electrolyte disorders and tumor metastasis in children with intracranial tumors after MTX chemotherapy.
KEYWORDS intracranial tumors； methotrexate； methionine synthase reductase； genetic polymorphism； adverse reaction； prognosis

中枢神经系统（central nervous system，CNS）肿瘤包 剂量、不良反应、预后等资料。本研究获得本院科学研
括颅内肿瘤与脊髓肿瘤，其已成为我国儿童群体中最为 究伦理委员会的批准，伦理批号：sjtkyll-lx-2023（053）。
常见的实体肿瘤类型。国家儿童肿瘤监测中心编制的 本研究的纳入标准：（1）2019年4月至2021年12月
《国家儿童肿瘤监测年报（2022）》显示，我国儿童中男孩 就诊于本院儿科；（2）符合世界卫生组织中枢神经系统
[7]
CNS 肿瘤的发病率为 19.84/百万，女孩为 17.37/百万，可 肿瘤分类（第五版）中关于颅内肿瘤的诊断标准 ；（3）年
见，CNS肿瘤是儿童健康的一大威胁。在针对儿童颅内 龄不超过 18 周岁，性别不限；（4）治疗方案包含 MTX 化
肿瘤的治疗中，甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）作为一种 疗；（5）测定了给药后24 h和42 h MTX血药浓度。本研
2
叶酸类似物，因其独特的抗肿瘤机制而备受关注，即 究的排除标准：（1）MTX 化疗剂量＜1 g/m ；（2）MTRR
MTX 通过竞争性抑制二氢叶酸还原酶活性，干扰 DNA rs10380 C＞T基因分型不成功；（3）病历资料不完整。
[1]
合成过程，进而发挥显著的抗肿瘤效果 。作为儿童颅 2 方法
内肿瘤治疗中的常用药物，MTX 的疗效和安全性一直 2.1 外周血基因组DNA提取
是医学研究的热点 。然而，MTX的代谢过程涉及多个 收集患儿常规诊疗剩余的废弃血样，按照作者团队
[2]
[8]
转运体和代谢酶的参与，这些酶和转运体编码基因的单 前期建立的方法 ，提取外周血基因组 DNA，经 1.5% 琼
核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）可 脂糖凝胶电泳鉴定所提取DNA的完整性。
能导致 MTX 在药代动力学过程中出现个体差异，进而 2.2 基因型检测
[3]
影响患者的疗效和不良反应 。其中，甲硫氨酸合成酶 采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（matrix-
还原酶（methionine synthase reductase，MTRR）作为叶酸 assisted laser desorption/ionization-time of flight mass
代谢中的关键酶，在MTX的代谢中扮演着重要角色。 spectrometry，MALDI-TOF-MS）法进行基因型检测 ，该
[7]
MTRR的主要功能是维持甲硫氨酸合成酶（methio‐ 法分为聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）
nine synthase，MTR）的活性。MTR 以维生素 B12为甲基 扩增、碱性磷酸酶（shrimp alkaline phosphatase，SAP）消
载体，催化同型半胱氨酸甲基化为甲硫氨酸。然而，随 化反应、单碱基延伸反应、MALDI-TOF-MS 法检测多个
着维生素B12的氧化，MTR的活性降低，此时MTRR通过 环节，实验过程如下。
还原被氧化的维生素B12来保持MTR的活性 。以往研 2.2.1 PCR扩增
[4]
究表明，MTRR rs1801394 A＞G 的突变会导致 MTRR 活 采用Assay Designer 3.1软件设计PCR引物。上、下
性降低，进而影响叶酸的代谢 。考虑到叶酸在MTX代 游扩增引物分别为 5′-ACGTTGGATGGATGAGTTAA-
[5]
谢中的重要性，作者推测MTRR基因可能还存在其他影 GATCCCATGC-3′和 5′-ACGTTGGATGGACAACCTT-
响MTX代谢过程的SNP位点。有研究显示，rs10380位 TTAGTGATCC-3′。PCR反应体系为6 μL，包括去离子
点是位于MTRR编码区内的错义突变，在中国北方汉族 水 1.8 μL、PCR 缓冲液 0.5 μL、MgCl2 0.4 μL、脱氧核糖
人群中变异率较高、SNP功能评分高、与rs1801394相关 核苷三磷酸 0.1 μL、HotStart Taq 酶 0.2 μL、上下游引物
性系数低，该位点多态性可能对颅内肿瘤患儿使用 各 1 μL、DNA 模板 1 μL。PCR 扩增程序：95 ℃预变性
[6]
MTX 化疗的有效性和安全性造成影响 。本研究探讨 2 min；95 ℃变性 30 s，56 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 1 min，
了 MTRR rs10380 C＞T 多态性在颅内肿瘤患儿中的分 共45个循环；72 ℃延伸5 min。
布特点，并分析了其与MTX血药浓度、不良反应和预后 2.2.2 SAP消化反应
的相关性，以期为 MTX 在颅内肿瘤患儿中的个体化用 SAP消化反应体系为2 μL，包括去离子水1.53 μL、
药提供理论依据，从而提高治疗效果和安全性，保障患 SAP 缓冲液 0.17 μL、SAP 0.3 μL。反应程序：37 ℃
儿合理用药。 40 min，85 ℃ 5 min。延伸引物为5′-TTCAGAAAAGA-
1 研究对象 GCTCAGAC-3′。
本研究为回顾性研究，以 2019 年 4 月至 2021 年 12 2.2.3 单碱基延伸反应
月在首都医科大学附属北京世纪坛医院（以下简称“本 单碱基延伸反应体系为2 μL，包括三蒸水0.619 μL、
院”）儿科进行 MTX 化疗的颅内肿瘤患儿为研究对象， iPLEX缓冲液0.2 μL、终止混合液0.2 μL、引物0.94 μL、
通过医院电子病历系统收集患儿年龄、性别、瘤种、MTX 单碱基延伸酶 0.041 μL。反应程序：94 ℃预变性 30 s；

中国药房 2024年第35卷第21期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 21 · 2647 ·