Page 76 - 《中国药房》2024年21期

2.5 大鼠海马齿状回区神经元病理变化的检测 （P＜0.05）；与SAE组相比，紫草素低、中、高剂量组大鼠
“2.4”项下实验结束后 24 h，每组随机选取 6 只大 “新臂”内活动距离百分比、中心区域停留时间及行走距
鼠，处死并收集海马齿状回（dentate gyrus，DG）区脑组织 离均显著升高/延长（P＜0.05），且呈剂量依赖性（P＜
适量，在4%多聚甲醛溶液中固定24 h，经石蜡包埋后切 0.05）；与紫草素高剂量组相比，紫草素高剂量+Roc A组
片（厚约 5 μm）。将切片置于尼氏染色液中染色 5 min， 大鼠“新臂”内活动距离百分比、中心区域停留时间及行
观察海马 DG 区神经元的病理变化。采用 Image J 软件 走距离均显著降低/缩短（P＜0.05）。结果见表1。
计数完整神经元数目。 表1 各组大鼠Y迷宫实验和旷场实验结果比较（x±s，
2.6 大鼠海马 DG 区脑组织中小胶质细胞极化标志物 n＝12）
的检测 组别 “新臂”内活动距离百分比/% 中心区域停留时间/s 行走距离/cm
对照组 75.54±3.19 18.54±0.41 936.77±39.55
取“2.5”项下各组大鼠海马 DG 区脑组织切片，用
SAE组 43.68±2.01 a 5.88±0.19 a 723.34±21.15 a
0.3% Triton X-100处理后用5%牛血清白蛋白在37 ℃下 紫草素低剂量组 50.52±2.11 b 8.37±0.32 b 778.83±20.67 b
紫草素中剂量组 57.62±2.34 bc 11.52±0.40 bc 830.64±28.68 bc
阻断 1 h；随后，将切片用一抗 CD86（稀释比例 1∶600）、
紫草素高剂量组 66.43±2.98 bcd 15.34±0.43 bcd 901.12±30.03 bcd
CD206（稀释比例 1∶500）在 4 °C 的潮湿条件下孵育过 紫草素高剂量+Roc A组 54.88±2.37 e 10.68±0.41 e 813.77±25.53 e
夜，然后与二抗（稀释比例 1∶800）在室温下孵育 1 h；经 a：与对照组相比，P＜0.05；b：与SAE组相比，P＜0.05；c：与紫草素
磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后，用 DAPI 复染细胞核 10 低剂量组相比，P＜0.05；d：与紫草素中剂量组相比，P＜0.05；e：与紫草
素高剂量组相比，P＜0.05。
min。通过荧光显微镜捕获图像，并统计 CD86（呈绿
3.2 紫草素对大鼠海马DG区神经元病理的影响
色）、CD206（呈红色）阳性细胞数。
对照组大鼠神经元排列整齐、致密，细胞呈圆形。
2.7 大鼠海马DG区脑组织中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10
SAE 组大鼠神经元呈空泡状，排列松散，形态不规则。
水平的检测
与SAE组相比，紫草素低、中、高剂量组大鼠神经元损伤
取各组剩余的 6 只大鼠，处死并收集海马 DG 区脑
得到改善；与紫草素高剂量组相比，紫草素高剂量+Roc A
组织。将脑组织与匀浆液以1∶5的比例混合进行匀浆，
组大鼠神经元损伤严重，详见图1。与对照组相比，SAE
按照ELISA试剂盒说明书检测大鼠海马DG区脑组织中
组大鼠海马 DG 区脑组织中完整神经元数目显著减少
IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10水平。
（P＜0.05）；与SAE组相比，紫草素低、中、高剂量组大鼠
2.8 大鼠海马 DG 区脑组织中 cGAS、STING 蛋白表达
海马 DG 区脑组织中完整神经元数目显著增加（P＜
的检测
0.05），且呈剂量依赖性（P＜0.05）；与紫草素高剂量组相
取“2.7”项下的海马 DG 区脑组织，以 RIPA 裂解缓
比，紫草素高剂量+Roc A组大鼠海马DG区脑组织中完
冲液提取脑组织总蛋白。BCA 法测定组织中总蛋白
整神经元数目显著减少（P＜0.05）。结果见表2。
质浓度后，电泳分离 45 μg 蛋白样品，然后转移到聚
偏二氟乙烯（PVDF）膜上，在室温下用5%脱脂牛奶封闭
2 h；加入 cGAS（稀释比例 1∶3 000）、STING（稀释比例
1∶1 000）一抗、GAPDH（稀释比例 1∶4 000），在 4 °C 下
孵育过夜；用 PBS 冲洗后，将 PVDF 膜与二抗（稀释比
例 1∶3 000）在室温下孵育1 h；最后，使用ECL试剂和凝 A.对照组 B. SAE组
胶成像系统对印迹进行可视化。使用Image J软件分析
条带灰度值，以 cGAS、STING 蛋白与 GAPDH（内参）蛋
白的条带灰度值比值表示 cGAS、STING 蛋白的相对表
达水平。
2.9 统计学方法 C.紫草素低剂量组 D.紫草素中剂量组
使用SPSS 25.0软件进行数据分析。数据均以x±s
表示，采用单因素方差分析及 SNK-q 检验进行组间比
较。检验水准α＝0.05。
3 结果
3.1 紫草素对大鼠学习记忆能力、焦虑行为的影响
E.紫草素高剂量组 F.紫草素高剂量+Roc A组
与对照组相比，SAE组大鼠“新臂”内活动距离百分 注：箭头指向空泡化变性神经元。
比、中心区域停留时间及行走距离均显著降低/缩短 图1 大鼠海马DG区神经元病理的显微图（尼氏染色）

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