Page 47 - 《中国药房》2024年20期
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优化研究所指南推荐使用非甾体抗炎药来缓解 NP，但                         （批号 E-CS-0050c）购自上海恒斐生物科技有限公司；
          非甾体抗炎药的耐药性和长期使用后的副作用仍然会                            PCR反应试剂盒（批号28322）购自上海齐源生物科技有
          困扰患者 。因此，迫切需要一种治疗NP的新药。                            限公司；兔抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-
                  [2]
              穿心莲内酯是一种天然药物，在穿心莲中大量存                          phosphate dehydrogenase，GAPDH）、离子钙接头蛋白分
          在，具有抗菌、抗哮喘、抗病毒、保护神经和抗炎等作                           子 1（ionized calcium binding adaptor molecule-1，Iba-1）、
            [3]
                    [4]
          用 。Lin 等 发现，穿心莲内酯可以缓解大鼠术后的伤                        Gas6、Axl 抗 体（批 号 分 别 为 ab181602、ab283319、
                        [5]
          口疼痛；Wang 等 发现，穿心莲内酯可以抑制脊髓小胶                        ab86059、ab215205）及辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔
          质细胞的活化，改善炎症性疼痛小鼠的机械性异常性疼                           IgG二抗（批号ab205718）均购自英国Abcam公司。
                     [6]
          痛；孙跃先等 发现，穿心莲内酯可以改善糖尿病周围神                          1.3 实验动物
          经病变大鼠坐骨神经功能损伤，减轻机械性疼痛。但穿                               雄性 SD 大鼠，7～8 周龄，体重 180～230 g，购自湖
          心莲内酯缓解疼痛的具体作用机制尚不清楚。有研究                            北贝恩特生物科技有限公司，生产许可证号为 SCXK
          显示，上调生长停滞特异性蛋白 6（growth arrest specific           （鄂）2021-0027。所有大鼠饲养在温度20.0～26.0 °C、相
          protein 6，Gas6）表达可减轻炎症，缓解尿酸单钠诱导的                   对湿度35.0%～75.0%且保持12 h光/暗循环的标准实验
          急性痛风疼痛 。打开 ATP 敏感钾通道（ATP-sensitive                 室中，分笼饲养，每个笼子6只，适应性饲养1周，自由获
                      [7]
          potassium channel，KATP ）可激活Gas6/受体型酪氨酸激酶           取食物和水。所有实验方案和程序均经武汉华联科生
          Axl（简称“Axl”）信号轴以诱导炎症耐受，从而缓解慢性                      物技术有限公司动物护理与福利委员会审核批准，审批
          疼痛 。由此可知，Gas6/Axl信号轴与NP密切相关。基                      号为HLK-202306215。
              [8]
          于此，本研究基于 Gas6/Axl 信号轴，探讨穿心莲内酯对                     2 方法
          大鼠NP的影响机制，以期为NP的临床用药提供参考。                          2.1 建模、分组与干预
          1 材料                                                   将大鼠随机分为假手术组、模型组、穿心莲内酯低
          1.1 主要仪器                                           剂量（穿心莲内酯-L）组、穿心莲内酯中剂量（穿心莲内
              本研究所用主要仪器包括 ZL-024B 型机械测痛仪                     酯-M）组、穿心莲内酯高剂量（穿心莲内酯-H）组、阿魏酸
         （安徽耀坤生物科技有限公司）、MK3型多功能全自动酶                          钠（阳性对照）组，每组12只。除假手术组大鼠只暴露坐
          标仪（河南康拓医疗器械销售有限公司）、HPBIO-JX34                      骨神经而不结扎外，其余各组大鼠均采用坐骨神经慢性
                                                                                       [9]
          型电泳仪[上海赫澎（上海）生物科技有限公司]、Xin‐                        压迫损伤法复制 NP 大鼠模型 ：腹膜内注射 3% 戊巴比
          yan22-013 型离心机（上海欣言生物科技有限公司）、                      妥钠（40 mg/kg）后，经手术暴露大鼠的右坐骨神经，并在
          7500型聚合酶链式反应（PCR）仪（美国ABI公司）、Echo                   显微镜下使用4.0缝合线结扎右坐骨神经（以1 mm间隔
          Revolve型光学显微镜（美国Echo Laboratories公司）。              重复4次）。术后24 h内，大鼠出现下肢足趾并拢背屈、
          1.2 主要药品与试剂                                        跛行及悬空、舔舐等状态，视为NP模型复制成功。
              穿心莲内酯标准品（批号 110797-201609，纯度≥                      建模成功后，穿心莲内酯-L、穿心莲内酯-M、穿心莲
          98%）购自广州隽沐生物科技股份有限公司；阿魏酸钠                          内酯-H 组大鼠分别鞘内注射 1、5、10 mg/kg 穿心莲内酯
                                                                            [6]
          片（批号 H20073115，规格 50 mg）购自成都亨达药业有                  溶液（含5%乙醇） 并灌胃等体积生理盐水；阿魏酸钠组
          限公司；白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因              大鼠鞘内注射等体积生理盐水（含5%乙醇）并灌胃阿魏
                                                                            [10]
          子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、前列腺素E2 （pros‐    酸钠（150 mg/kg） ；假手术组和模型组大鼠均鞘内注射
          taglandin E2，PGE2 ）、P 物质（substance P，SP）酶联免疫吸      等体积生理盐水（含 5% 乙醇）并灌胃等体积生理盐水，
          附 试 验（ELISA）试 剂 盒（批 号 分 别 为 CB10218-Ra、            每日给药1次，连续14 d。
          CB11057-Ra、CB10693-Ra、CB10122-Ra）均购自上海             2.2 疼痛敏化行为分析
          科艾博生物技术有限公司；苏木精-伊红（hematoxylin                         分别于造模前和造模后给药前以及给药 7、14 d 时
          eosin，HE）染色试剂盒（批号 YX-DK00686）购自浙江羽                 对各组大鼠进行疼痛敏化行为分析。使用 Von Frey 细
          翔生物科技有限公司；RIPA裂解液（批号JLC-E1144）购                    丝刺激大鼠足底部，采用机械测痛仪检测机械性缩足反
          自江西江蓝纯生物试剂有限公司；蛋白定量试剂盒（批                           射阈值（mechanical withdrawal threshold，MWT），重复检
          号PT0001）购自北京雷根生物技术有限公司；RNA提取                       测 3 次，间隔 5 min，取平均值。将大鼠足底表面放置在
          试剂盒（Trizol法）（批号EZB-TZ1-L）购自上海海方生物                  辐射热源上方的玻璃地板上，测定开始照射到出现缩足
          技术有限公司；反转录试剂盒（批号JK-R5096）购自上海                      的时间，即热刺激缩足反射潜伏期（thermal withdrawal
          晶抗生物工程有限公司；电化学发光（ECL）检测试剂盒                          latency，TWL），重复检测3次，间隔5 min，取平均值。


          中国药房  2024年第35卷第20期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 20    · 2489 ·
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