Page 32 - 《中国药房》2024年15期
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芍药甘草汤出自《伤寒论》，为古代经典名方之一。                         180～220 g，购自南京安诺康生物科技有限公司，动物生
          方中，白芍酸寒，可养血敛阴、柔肝止痛；甘草甘温，可健                          产许可证号为SCXK（鲁）2022-0006，实验动物伦理编号
          脾益气、缓急止痛；两者配伍，具有柔筋止痛的功效，为                           为 202303A033。本研究所用的 SPF 级 ICR 小鼠共 60
                                 [1]
          张仲景治疗脚挛急的良方 。文献研究表明，芍药甘草                            只，雌雄各半，体重18～22 g，购自北京维通利华实验动
          汤具有抗炎止痛、保护神经、止咳平喘以及解痉等作用，                           物技术有限公司，动物生产许可证号为SCXK（京）2021-
                                                    [2]
          其化学成分主要为黄酮类、皂苷类以及萜苷类等 。芍                            0006，实验动物伦理编号为 202309A035。大鼠和小鼠
                                             [3]
          药甘草汤的临床疗效突出，且安全性较好 。然而，目前                           购入后均饲养在 SPF 级实验室中，实验室环境温度为
          关于该方发挥缓急止痛作用的药效物质基础及作用机                             25 ℃、相对湿度为 45%～65%，饲养期间均自由进食和
          制尚不完全清楚，亟待深入研究。前期研究发现，芍药                            饮水。所有实验动物均适应性喂养 1 周后进行后续
                                                 [4]
          甘草汤化学成分多集中在乙酸乙酯萃取物中 ，且其解                            实验。
          痉效果较好。但该萃取物中化学成分较为复杂，真正发                            2 方法与结果
          挥缓急止痛的有效部位或有效成分尚不明确。因此，本                            2.1 样品制备
          研究拟采用大孔树脂吸附法，结合大鼠离体肠痉挛模                                 用 95% 乙醇充分浸泡 HP20 大孔树脂，使其溶胀后
          型、小鼠醋酸扭体模型等确认芍药甘草汤缓急止痛的有                            湿法装柱。装柱后先用95%乙醇洗脱，然后再用大量水
          效部位，并对小鼠灌胃给药后的血清进行化学分析，初                            洗脱至无醇味。将芍药甘草汤乙酸乙酯萃取物配制成
          步阐明芍药甘草汤发挥缓急止痛的有效成分，以期为后                            0.2 g/mL（以生药量计）的溶液后上样，静置吸附 2 h，收
          续该方的深入研究提供一定的理论依据。                                  集流出液，即为大孔树脂流出部位；用 2 倍柱体积（BV）
          1 材料                                                水除杂后再用 8 BV 90% 乙醇洗脱，收集 90% 乙醇洗脱
          1.1 主要仪器                                            液，回收乙醇，即为大孔树脂 90% 乙醇洗脱部位，备用。
              本研究所用的主要仪器包括：HV1403 型离体组织                       大孔树脂流出部位和大孔树脂 90% 乙醇洗脱部位经真
          器官恒温灌流系统、BL-420N型生物信号采集与分析系                         空干燥后分别得到15.9、16.2 g样品。
          统 、HV1403 型 氧 气 泵（成 都 泰 盟 软 件 有 限 公 司），             2.2 芍药甘草汤缓急止痛有效部位的筛选
          YP20001型电子天平（上海虞钧科学有限公司），Infinite                   2.2.1 大鼠离体肠张力实验筛选有效部位
          F50 型酶标仪（德国 PerkinElmer 公司），R-210 型旋转蒸                  每次实验用1只大鼠，实验共重复3次。实验前，大
          发仪（上海安亭科学仪器厂），Micro17型冷冻离心机[赛                       鼠先禁食不禁水 24 h，次日颈椎脱臼处死大鼠，快速切
          默飞世尔科技（中国）有限公司]，TS100 型恒温混匀仪                        开腹腔，剪取距回盲部 1.5 cm 处小肠肠段约 1.5 cm，迅
         （杭州瑞成仪器有限公司），AB SCIEX Triple TOFM5600                速放入盛有台氏液的培养皿中，除去内容物制成离体标
          型质谱仪（美国AB Sciex公司）。                                 本；将标本放于恒温平滑肌实验系统标本浴槽中，用细
          1.2 主要药品与试剂                                         线将小段肠管悬挂于通气管和张力换能器之间，并且持
              芍药甘草汤全方（批号 20230702，质量浓度以生药                     续通入 95%O2和 5%CO2混合气体。实验开始后先记录
          量计为 0.4 g/mL）、芍药甘草汤乙酸乙酯萃取物（批号                       离体肠段正常收缩波形，待曲线稳定后，向平滑肌槽内
          20230703，质量浓度以生药量计为0.4 g/mL）均由本实验                   加入乙酰胆碱（质量浓度为0.8 μg/mL，给药体积0.1 mL）
                                                                          [5]
          室自制；奥替溴铵片（批号2022082522，规格40 mg）购自                   引起肠道痉挛 ，待肠段稳定后依次加入药物并记录给
          晋城海斯制药有限公司；芍药苷对照品（批号 110736-                        药前后 5 min 的肠管运动波形。每次给药后，用预热的
          201035，纯 度 97.7%）、甘 草 苷 对 照 品（批 号 111610-           台氏液冲洗肠管3次，再进行下一次给药。给药顺序：阳
          201607，纯 度 93.1%）和 甘 草 酸 对 照 品（批 号 110731-          性对照药奥替溴铵片（按人日服用量240 mg确定给药质
          201720，纯度97.7%）均购自中国食品药品检定研究院；                      量浓度为 0.025 2 g/mL），芍药甘草汤全方、芍药甘草汤
          小鼠肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、          乙酸乙酯萃取物、大孔树脂流出部位以及大孔树脂90%
          环氧合酶 2（cyclooxygenase-2，COX-2）、白细胞介素 1β             乙醇洗脱部位（4 种样品的给药质量浓度按生药量计均
         （interleukin-1β，IL-1β）、前列腺素 E2 （prostaglandin E2，    为 13.44 g/mL，根据人日用量 128 g 确定）。检测并记录
          PGE2 ）酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒（批号均为                       给药前后的张力大小，并计算张力抑制率。张力抑制
          2023120701）均购自南京翼飞雪生物科技有限公司；                        率＝（给药前平均张力－给药后平均张力）/给药前平均
          HP20 大 孔 树 脂（批 号 N11HS200762，粒 径 0.30～1.25          张力×100%。采用 GraphPad Prism 8.0.2 软件作图并进
          mm，非极性）、氯化乙酰胆碱标准品（批号 D09HB20355                     行数据统计分析；计量资料满足正态分布以 x±s 表示，
          8，纯度98%）均购自上海源叶生物科技有限公司。                            多组间比较采用单因素方差分析，方差齐时组间两两比
          1.3 动物                                              较采用 LSD-t 检验，方差不齐时组间两两比较采用
              本研究所用的 SPF 级 SD 雄性大鼠共 3 只，体重                    Dunnett-T3检验；检验水准α＝0.05。结果见图1、表1。


          · 1826 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 15                            中国药房  2024年第35卷第15期
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