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tricular  ejection  fraction，LVEF）、舒 张 末 期 容 积（end-  据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
          diastolic volume，EDV）和等容舒张时间（isovolumic re‐         两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
          laxation time，IVRT）。超声检测后采集各组大鼠尾静脉                  3 结果
          血约 0.8 mL，采用全自动生化分析仪测定其血尿素氮                         3.1 槲皮素对大鼠心功能指标的影响
         （blood urea nitrogen，BUN）、Scr 水平。提前收集各组大                 与假手术组比较，模型组大鼠LVEF、IVRT、EDV均
          鼠末次给药后24 h内的尿液，采用全自动生化分析仪测                          显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，槲皮素低、高剂量
          定其尿蛋白浓度，乘以 24 h 尿液量，即可得到 24 h 尿蛋                    组大鼠LVEF、IVRT、EDV均显著升高，且具有剂量依赖
          白水平。                                                性（P＜0.05）。与槲皮素高剂量组比较，槲皮素高剂量+
          2.3 大鼠心肾组织纤维化病理学观察                                  740Y-P 组 大 鼠 LVEF、IVRT、EDV 均 显 著 降 低（P＜
              大鼠心肾功能指标检测结束后再次采集各组大鼠                           0.05）。结果见表1。
          尾静脉血，以2 000 r/min离心10 min，收集上清液，即得                   表1 各组大鼠LVEF、IVRT、EDV比较（x±s，n＝12）
          大鼠血清样品，备用。麻醉大鼠，打开胸腔取出心脏和                            组别                 LVEF/%    IVRT/ms    EDV/μL
          肾脏，分别剪下约0.6 g心肌组织和0.6 g肾组织，保存在                      假手术组              84.51±3.20  47.98±2.73  67.25±3.32
                                                              模型组               61.42±2.05 a  29.69±1.81 a  46.13±2.10 a
          液氮中以备后续检测。剩余心肾组织分别以生理盐水
                                                              槲皮素低剂量组           71.32±2.43 b  37.15±2.20 b  55.34±2.71 b
          漂洗、4%多聚甲醛固定、30%蔗糖脱水、二甲苯透明、浸                         槲皮素高剂量组           82.06±2.96 bc  45.76±2.45 bc  64.02±3.24 bc
          蜡包埋后切片；选取完好的心肾组织切片，浸泡二甲苯                            槲皮素高剂量+740Y-P组    62.84±2.12 d  31.23±1.79 d  47.92±2.35 d
                                                                 a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与槲皮
          脱蜡后进行分级水化处理，然后以蒸馏水漂洗后行Mas‐
                                                              素低剂量组比较，P＜0.05；d：与槲皮素高剂量组比较，P＜0.05。
                 [14]
          son染色 。采用显微镜观察大鼠心肾组织胶原沉积情
                                                              3.2 槲皮素对大鼠肾功能的影响
          况并拍照，然后运用 Image J 软件对心肾组织中胶原面
                                                                  与假手术组比较，模型组大鼠 BUN、24 h 尿蛋白、
          积和视野总面积进行定量后计算心肾组织的胶原容积
                                                              Scr 水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，槲皮素
          分 数（collagen  volume  fraction，CVF），具 体 公 式 为
                                                              低、高剂量组大鼠 BUN、24 h 尿蛋白、Scr 水平均显著降
          CVF＝胶原面积/视野总面积×100%。
                                                              低，且具有剂量依赖性（P＜0.05）。与槲皮素高剂量组
          2.4 大鼠血清与心肾组织中炎症指标检测
                                                              比较，槲皮素高剂量+740Y-P 组大鼠 BUN、24 h 尿蛋白、
              取“2.3”项下血清样品，按 ELISA 试剂盒方法检测
                                                              Scr水平均显著升高（P＜0.05）。结果见表2。
          大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平。另外，取“2.3”项下心肾
                                                              表2 各组大鼠 BUN、24 h 尿蛋白、Scr 水平比较（x±s，
          组织适量，以 RIPA 裂解液裂解，研磨匀浆，再以 3 000
                                                                   n＝12）
          r/min 离心 15 min，取上清液，即得心肾组织样品溶液。
                                                              组别               BUN/（mmol/L）  24 h尿蛋白/mg  Scr/（μmol/L）
          取部分心肾组织样品溶液（剩余部分用于后续实验）按                            假手术组              21.53±3.83  23.61±2.40  30.74±7.81
                                                              模型组               53.96±5.72 a  52.85±5.13 a  112.36±12.52 a
          ELISA 试剂盒方法检测大鼠心肾组织中 IL-1β、TNF-α
                                                              槲皮素低剂量组           37.85±4.75 b  38.13±4.26 b  72.94±9.83 b
          水平。
                                                              槲皮素高剂量组           23.30±3.69 bc  24.98±2.53 bc  33.41±8.16 bc
          2.5 大鼠心肾组织中 PI3K/Akt/NF-κB 信号通路相关                   槲皮素高剂量+740Y-P组    51.74±5.41 d  49.72±4.78 d  103.58±13.10 d
          蛋白表达检测                                                 a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与槲皮
              取“2.4”项下各组大鼠剩余的心肾组织样品溶液适                        素低剂量组比较，P＜0.05；d：与槲皮素高剂量组比较，P＜0.05。
          量，加入蛋白缓冲液，于沸水浴内煮沸变性，然后每组分                           3.3 槲皮素对大鼠心肾组织纤维化的影响
          别取出20 μg心肌组织和肾组织总蛋白样品进行十二烷                              与假手术组比较，模型组大鼠心肾组织CVF均显著
          基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜；以 5% 脱脂奶                          升高（P＜0.05）。与模型组比较，槲皮素低、高剂量组大
          粉 溶液封闭膜上蛋白，加入 p-NF-κB p65、p-PI3K、p-                 鼠心肾组织 CVF 均显著降低，且具有剂量依赖性（P＜
          Akt、PI3K、Akt、NF-κB p65与GAPDH抗体（稀释度均为                0.05）。与槲皮素高剂量组比较，槲皮素高剂量+740Y-P
          1∶1 000）孵育过夜，然后再加入相应二抗（稀释度为                         组大鼠心肾组织CVF均显著升高（P＜0.05）。结果见图
          1∶5 000）孵育 2 h。采用化学发光法显色后拍摄蛋白条                      1和表3。
          带图像，运用 Image J 软件分析蛋白灰度值，以 GAPDH                    3.4 槲皮素对大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平的影响
          为内参量化p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-NF-κB p65、NF-              与假手术组比较，模型组大鼠血清中 IL-1β、TNF-α
          κB p65 蛋白表达水平，并以 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-           水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，槲皮素低、
          NF-κB p65/NF-κB p65 表示 PI3K、Akt、NF-κB p65 蛋白        高剂量组大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平均显著降低，且
          的磷酸化水平。                                             具有剂量依赖性（P＜0.05）。与槲皮素高剂量组比较，
          2.6 统计学方法                                           槲皮素高剂量+740Y-P组大鼠血清中IL-1β、TNF-α水平
              采用 GraphPad Prism8.0 软件进行统计学分析。数                均显著升高（P＜0.05）。结果见表4。


          · 1614 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13                            中国药房  2024年第35卷第13期
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