Page 79 - 《中国药房》2024年13期
P. 79

心肾综合征（cardiorenal syndrome，CRS）是指心脏            ELISA试剂盒和兔源磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、
          或肾脏中一个器官功能损伤导致另一个器官急性或慢                            磷酸化 PI3K（p-PI3K）、磷酸化 Akt（p-Akt）、PI3K、Akt、
          性功能障碍，最终导致心肾共同损伤而形成的一种临床                           NF-κB p65、GAPDH 抗体以及辣根过氧化物酶标记的
          综合征，发病率高且预后差，严重威胁患者生命安全，是                          山羊抗兔 IgG 二抗（批号分别为 ab255730、ab236712、
          临床中亟待解决的一个难题             [1―2] 。CRS 发病机制复杂，        ab239882、ab182651、ab38449、ab191606、ab8805、ab16502、
          与交感神经过度兴奋、氧化应激、炎症反应等有关，其中                          ab181602、ab6721）均购自英国Abcam公司等。
          炎症反应在 CRS 发病过程中起到关键作用，研究发现，                        1.3 实验动物
          减轻炎症反应可有效缓解CRS引起的心肾损伤                   [3―4] 。磷       本研究所用动物为 SPF 级 SD 雄性健康大鼠，体重
          脂酰肌醇 3 激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白      （220±10） g，6～7周龄，购自湖北贝恩特生物科技有限
          激酶 B（protein kinase B，Akt）/核因子 κB（nuclear factor   公司[动物生产许可证号为SCXK（鄂）2021-0027]。大鼠
          kappa-B，NF-κB）是机体重要的炎症信号，可通过调控炎                    在独立动物房中饲养，环境条件为温度（23.5±2） ℃、相
          症反应和细胞生长、代谢与凋亡等介导各种炎性疾病的                           对湿度（60±5）%、光照 12 h 明/12 h 暗。本研究已获得
                      [5]
          发生发展过程 。研究显示，PI3K/Akt/NF-κB 信号通路                   邢台市人民医院医学伦理委员会批准，伦理批号为
                                                     [6]
          介导了右心室功能障碍诱导的Ⅱ型 CRS 发病过程 ，而                        2022[092]。
          抑制 PI3K/Akt/NF-κB 信号通路激活可减少炎症因子产                   2 方法
                                                    [7]
          生并减轻Ⅱ型CRS大鼠心脏和肾脏组织病理损伤 。由
                                                             2.1 构建CRS大鼠模型及分组干预
          此可知，PI3K/Akt/NF-κB 信号通路是治疗 CRS 的潜在
                                                                 参照文献方法 ，采用左冠状动脉前降支结扎结合
                                                                             [11]
          靶点。
                                                             肾急性缺血再灌注的方法构建 CRS 大鼠模型：取 SD 雄
              槲皮素是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于多种
                                                             性健康大鼠60只，腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥钠麻醉后
          植物的花、叶、果实中，具有显著抗炎、抗凋亡与抗纤维
                                                             做气管插管，连接呼吸机辅助呼吸，同时于肢体皮下插
          化功效。研究显示，槲皮素可有效改善压力超负荷和缺
                                                             入电极监控心电图，于胸骨左缘第3、4肋间做一个纵向
                                               [8]
          血再灌注后啮齿动物模型心功能障碍症状 ，可通过抑
                                                             切口，打开胸膜和心包膜，寻找左冠状动脉前降支起始
                                                   [9]
          制铁死亡而对糖尿病肾病小鼠起到肾保护作用 ，还可
                                                             部并进行结扎，肉眼观察到大鼠左心室壁由红色变为苍
          抑制NF-κB信号传导并通过其抗氧化、抗炎和抗凋亡作
                                          [10]
          用而显著减轻大鼠肾缺血再灌注损伤 ，因而笔者推测                           白色且心电图 ST 段抬高超过 0.1 mV，表明心肌缺血大
                                                             鼠模型构建成功。将大鼠心脏迅速送回胸腔，同时挤出
          槲皮素可能通过调控 PI3K/Akt/NF-κB 信号通路影响
                                                             胸腔内的血液和气体，收拢荷包关闭胸腔，局部消毒，复
          CRS 的发病过程。基于此，本文通过构建 CRS 大鼠模
                                                             苏大鼠。整个开胸时间不超过 1 min，术后腹腔注射青
          型，探究槲皮素调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路对其心肾
                                                             霉素预防感染。1 周后麻醉大鼠并打开腹腔，暴露肾蒂
          功能的保护作用，以期为寻找治疗 CRS 的新药提供
                                                             后将一侧肾血管进行结扎，缺血 30 min 后恢复血流，当
          参考。
                                                             术后 6 h 出现无尿或少尿，且伴有尿蛋白增高、血肌酐
          1 材料
                                                            （serum creatinine，Scr）水平升高时，表明 CRS 大鼠模型
          1.1 主要仪器
                                                             构建成功。最后，剔除造模失败或死亡的大鼠12只，共
              BK-400 型全自动生化分析仪购自济南童鑫生物科
                                                             48只大鼠造模成功。
          技有限公司；KR-C80 型彩色多普勒超声诊断仪购自徐
                                                                 将造模成功的大鼠随机分为模型组、槲皮素低剂量
          州市凯尔医学仪器有限公司；LS-206型轮转式石蜡切片
                                                                        [12]
                                                                                                   [12]
          机购自达科为（深圳）医疗设备有限公司；CKX41型倒置                        组（35 mg/kg ）、槲皮素高剂量组（70 mg/kg ）、槲皮素
          光学显微镜购自日本Olympus公司；KD-810A型酶标仪                     高剂量+740Y-P 组（70 mg/kg 槲皮素+3.5 mg/kg 740Y-
                                                              [13]
                                                             P ），每组 12 只；另取 12 只正常大鼠仅暴露器官或血
          购自科迪云享生物科技（南京）有限公司；1658033 型垂
          直电泳套装购自美国Bio-Rad公司等。                               管，不做缺血处理，设为假手术组。槲皮素低、高剂量组
          1.2 主要药品与试剂                                        大鼠灌胃相应药液（临用时以生理盐水溶解），槲皮素高
              槲皮素（批号100081-201610，含量99.8%）购自南京               剂量+740Y-P 组大鼠先按 70 mg/kg 灌胃槲皮素溶液，再
          森贝伽生物科技有限公司；PI3K/Akt/NF-κB信号通路激                    按 3.5 mg/kg 腹腔注射 740Y-P；假手术组和模型组大鼠
          活剂740Y-P（批号220306，纯度98%）购自武汉科斯坦生                   均灌胃并腹腔注射 10 mL/kg 的生理盐水。每天干预 1
          物科技有限公司；Masson 染色试剂盒（批号 220507）购                   次，连续14 d。
                                                             2.2 大鼠心肾功能指标检测
          自北京索莱宝生物科技有限公司；大鼠白细胞介素 1β
         （interleukin-1β，IL-1β）酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂                 末次给药 24 h 后，麻醉各组大鼠，仰卧固定后以超
          盒、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）          声诊断仪检测其心功能，包括左心室射血分数（left ven‐


          中国药房  2024年第35卷第13期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 13    · 1613 ·
   74   75   76   77   78   79   80   81   82   83   84