Page 78 - 《中国药房》2024年11期
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airway  epithelial  cells  in  asthmatic  rats，  the  mechanism  of  which  may  be  associated  with  inhibiting  p38  MAPK/STAT1  signaling
          pathway.
          KEYWORDS     evodiamine； asthma； inflammation； airway epithelial cells； apoptosis； p38 MAPK/STAT1 signaling pathway



              哮喘主要由遗传和环境两种因素引发，主要症状包                          因子（epidermal growth factor，EGF）重组蛋白（MAPK激
          括气急、胸闷等，其临床治疗以药物治疗为主，但无法根                           活剂，批号 abs01077，纯度＞97%）购自爱必信（上海）生
                                   [1]
          治，多数患者的预后并不理想 。因此，探究哮喘病理机                           物科技有限公司；地塞米松片（阳性对照，批号 211024，
          制、开发新的治疗药物，对于改善哮喘患者的预后具有                            规格0.75 mg）购自福州海王福药制药有限公司；兔源甘
          重要意义。研究指出，炎症反应可导致患者肺损伤反                             油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、B 细胞淋巴瘤 2（B cell
          复，并引发不正常的气道修复和重塑，从而影响肺功能，                           lymphoma-2，Bcl-2）一抗和辣根过氧化物酶（HRP）标记
          且炎症因子会导致气道上皮细胞损伤、凋亡，破坏气道                            的山羊抗兔 IgG 二抗（批号分别为 ab181602、ab194583、
          的正常结构和功能，故抑制气道炎症可能是控制哮喘的                            ab205718）均购自英国Abcam公司；兔源Bcl-2相关X蛋
                        [2]
          有 效 策 略 之 一 。 丝 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶（mitogen-            白（Bcl-2 associated X protein，Bax）、STAT1 一抗和瑞氏
          activated protein kinase，MAPK）/信号转导及转录激活因           染色液（批号分别为 K008076P、K002420P、G1040）均购
          子 1（signal  transducer  and  activator  of  transcription  1，  自北京索莱宝科技有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试
                                                 [3]
          STAT1）信号通路在炎症反应中具有重要作用 。MAPK                        剂盒、TUNEL染色试剂盒、超敏ECL化学发光试剂盒和
          是一类丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，主要有 3 个亚家族：                          兔源p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK（phosphorylated p38-
          p38、c-Jun 氨基端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）和       MAPK，p-p38  MAPK）一 抗（批 号 分 别 为 C0105S、
          胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，     C1098、P0018S、AF7668、AF5884）均购自上海碧云天生
                                                        [4]
          ERK），其 中 p38  MAPK 是 重 要 的 炎 症 信 号 通 路 。            物技术有限公司；肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-
          STAT1 是 p38 MAPK 的下游因子，受 p38 MAPK 激活 。              α，TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-4 酶联
                                                        [5]
          据报道，抑制MAPK/STAT1信号通路的激活可降低卵白                        免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为 ml002859、
          蛋白（ovalbumin，OVA）诱导的哮喘小鼠炎症细胞浸润                      ml064292、ml102825）均购自上海酶联生物科技有限
                                                [6]
          和炎症因子分泌，减轻肺损伤，延缓哮喘进展 。                              公司。
              吴茱萸为芸香科植物吴茱萸的干燥近成熟果实，是                          1.3 实验动物
                                  [7]
          具有抗哮喘活性的中药之一 。吴茱萸碱是从吴茱萸中                                SPF 级雄性 SD 大鼠 70 只，体重（200±10） g，购自
          分离出的一种生物碱，可用于减轻炎症反应和治疗心血                            三峡大学动物实验中心，生产许可证号为 SCXK（鄂）
                           [8]
          管疾病等。蹇强等 研究表明，吴茱萸碱可通过调控                             2022-0012。所有大鼠均饲养于温度（23±1） ℃、相对湿
          Notch 通路来抑制 S 期激酶相关蛋白 2（S-phase kinase-             度（55±5）%、12 h光/暗循环的环境下，自由摄食、饮水。
          associated protein 2，Skp2）的表达，从而改善哮喘小鼠气             本研究所涉及动物实验方案获得武汉华联科生物技术
          道重塑并减轻炎症反应；此外有研究显示，嗜酸性粒细                            有 限 公 司 动 物 伦 理 委 员 会 审 批 ，批 准 号 为 HLK-
          胞的迁移可加剧该细胞在哮喘患者支气管黏膜中的过                             202305332。
          度积累，而抑制 Notch 信号通路可抑制 MAPK 途径激                      2 方法
                                                 [9]
          活，进而抑制嗜酸性粒细胞的跨内皮迁移 。可见，                             2.1 造模与分组
          MAPK/STAT1 信号通路可能是吴茱萸碱抗炎的潜在途                            实验第1、8天，大鼠腹腔注射10%OVA-氢氧化铝混
          径之一。基于此，本研究拟探究吴茱萸碱对哮喘大鼠气                            合液（10 mg OVA、100 mg氢氧化铝加入生理盐水，总体
          道炎症反应及上皮细胞凋亡的影响及可能机制，旨在为                            积为 1 mL）0.5 mL，并同时于两侧腹股沟皮下注射上述
          哮喘的治疗和吴茱萸碱的进一步应用提供参考。                               混合液各0.25 mL，进行3点注射致敏；从实验第15天开
          1 材料                                                始，将大鼠放入自制玻璃雾化箱中，自由吸入2%OVA雾
          1.1 主要仪器                                            化液（2 mg OVA 加入生理盐水，总体积为 1 mL），每次
              本研究所用主要仪器包括 iMark680 型多功能酶标                     30 min，每天 1 次，持续 14 d，进行哮喘激发。若大鼠出
          仪（美国 Bio-Rad 公司）、BX61 型电动显微镜（日本                     现精神萎靡、情绪躁动、毛发缺乏光泽、口唇发绀、点头
          Olympus 公司）、E-Gel Imager 型凝胶成像仪（美国 Invi-            呼吸、呼吸频率加快症状，且支气管、肺组织可见哮喘样
          trogen 公司）、DYY-7C 型电泳仪电源和 DYCZ-40D 型转               病变，即表示模型复制成功           [10―11] 。
          膜仪（北京六一生物科技有限公司）等。                                      将SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、
          1.2 主要药品与试剂                                         吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、地塞米松组、
              吴茱萸碱对照品（批号518-17-2，纯度99.59%）购自                  EGF 组、吴茱萸碱高剂量+EGF 组，每组 10 只。除对照
          西安凯萌生物技术股份有限公司；OVA（批号 9006-59-                      组外，其余各组大鼠均按上述方法建立哮喘模型；对照
          1，纯度≥80%）购自美国Sigma公司；大鼠表皮细胞生长                       组大鼠以生理盐水代替致敏、激发药物，其余操作相同。


          · 1352 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 11                            中国药房  2024年第35卷第11期
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