Page 63 - 《中国药房》2024年11期
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2.2 大鼠分组与给药                                        软 件 量 化 条 带 灰 度 值 ，以 目 的 蛋 白 与 内 参 蛋 白
              将造模成功的PCOS大鼠随机分为PCOS组、ERI低                    （GAPDH）的灰度值比值表示蛋白的表达水平。
          剂量组、ERI 中剂量组、ERI 高剂量组和 ERI 高剂量+维                   2.8 统计学处理

          替泊芬组，每组 10 只。给药前，各组大鼠先称重，然后                            采用SPSS 22.0软件进行统计分析。数据用x±s表
                                            [7]
          ERI低、中、高剂量组大鼠根据相关文献 和前期预实验                         示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用
          结果分别灌胃 10、20、40 mg/kg 的 ERI（用 1% 二甲基亚              SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
          砜溶解）；ERI高剂量+维替泊芬组大鼠灌胃40 mg/kg的                     3 结果
                                             [8]
          ERI，同时腹腔注射 10 mg/kg 的维替泊芬 ；PCOS 组和                 3.1 ERI对大鼠体重和FPG水平的影响
          正常组大鼠灌胃等体积的1%二甲基亚砜。大鼠每日给                               与正常组比较，PCOS 组大鼠给药前体重和给药后
          药1次，连续6周。                                          体重、FPG水平均显著升高（P＜0.05）；与PCOS组比较，
          2.3 大鼠体重和空腹血糖水平检测                                  ERI 低、中、高剂量组大鼠给药后体重、FPG 水平均显著

              给药结束后，各组大鼠禁食 12 h 后称重，尾静脉采                     降低（P＜0.05）；与ERI高剂量组比较，ERI高剂量+维替
          血，测定空腹血糖（fasting blood glucose，FPG）水平。             泊芬组大鼠给药后体重、FPG 水平均显著升高（P＜
          2.4 大鼠性激素水平检测                                      0.05）。结果见表1。
              FPG水平检测完成后，麻醉大鼠，腹主动脉采血，以                         表1 各组大鼠体重和FPG水平比较（x±s，n＝10）
                                                                                      体重/g
          3 000 r/min离心15 min，分离血清，采用ELISA试剂盒检                组别                                     FPG/（mmol/L）
                                                                                 给药前        给药后
          测各组大鼠血清中 E2、T、FSH、LH 水平，并计算 LH/                     正常组              239.46±18.52  275.36±21.41  4.08±0.53
                                                              PCOS组            273.49±21.35 a  352.73±24.27 a  6.59±0.81 a
          FSH。然后将大鼠安乐死，收集其卵巢组织，将部分卵
                                                              ERI低剂量组          258.92±20.28  320.86±22.64 b  5.73±0.69 b
          巢组织固定在 4% 的多聚甲醛溶液中 24 h，剩余的卵巢                       ERI中剂量组          255.38±19.64  299.51±19.73 b  5.17±0.55 b
                                                              ERI高剂量组          265.41±22.57  280.64±17.28 b  4.61±0.39 b
          组织保存在－80 °C条件下，用于后续实验。
                                                              ERI高剂量+维替泊芬组     254.18±21.65  338.46±23.68 c  5.92±0.75 c
          2.5 大鼠卵巢组织形态学变化观察                                     a：与正常组比较，P＜0.05；b：与PCOS组比较，P＜0.05；c：与ERI高
              取 4% 多聚甲醛溶液中固定的卵巢组织，以石蜡包                       剂量组比较，P＜0.05。
          埋，切片，HE 染色 10 min，经漂洗、脱水后封片，在显微                    3.2 ERI对大鼠性激素水平的影响
          镜下观察各组大鼠卵巢组织的形态学变化，并计数随机                               与正常组比较，PCOS 组大鼠血清中 E2水平显著降
          5个视野内的囊性卵泡和黄体数量。                                   低，T、LH 水平和 LH/FSH 均显著升高（P＜0.05）；与
          2.6 大鼠卵巢组织细胞凋亡情况分析                                 PCOS 组比较，ERI 低、中、高剂量组大鼠血清中 E2水平
              将卵巢组织切片脱蜡、水化，以蛋白酶K处理，加入                        均显著升高，T、LH 水平和 LH/FSH 均显著降低（P＜
          TUNEL反应液，于37 ℃孵育60 min，然后加入以辣根过                    0.05）；与ERI高剂量组比较，ERI高剂量+维替泊芬组大

          氧化物酶标记的抗荧光素抗体，于37 ℃孵育30 min，用                      鼠血清中 E2水平显著降低，T、LH 水平和 LH/FSH 均显
                                                             著升高（P＜0.05）。结果见表2。
          二氨基联苯胺对载玻片进行染色后再用苏木精复染，在
                                                                 表2 各组大鼠性激素水平比较（x±s，n＝10）
          显微镜下观察各组大鼠卵巢组织细胞凋亡情况（标记为
                                                              组别           E 2/（pg/mL）  T/（ng/mL） LH/（mIU/mL） FSH/（mIU/mL） LH/FSH
          绿色的细胞），并计算细胞凋亡指数。凋亡指数＝凋亡                            正常组         124.95±15.38  4.27±0.52  14.62±1.73  12.53±1.16  1.32±0.15
          细胞数/总细胞数×100%。                                      PCOS组        63.58±7.24 a  9.41±1.02 a  38.25±4.79 a  11.36±1.37  3.37±0.42 a
                                                              ERI低剂量组      78.42±8.03 b  8.18±0.42 b  30.37±3.69 b  11.95±1.03  2.54±0.29 b
          2.7 大鼠卵巢组织中凋亡和Hippo-YAP信号通路相关                       ERI中剂量组      91.56±10.64 b  6.64±0.75 b  22.75±2.48 b  12.28±1.19  1.85±0.21 b
          蛋白表达检测                                              ERI高剂量组     113.75±12.69 b  5.29±0.59 b  17.42±1.94 b  12.59±1.36  1.38±0.14 b
                                                              ERI高剂量+维替泊芬组  71.35±7.41 c  8.93±0.91 c  33.95±4.27 c  11.38±1.25  2.98±0.33 c
              取各组大鼠冻存的卵巢组织，提取总蛋白，在RIPA
                                                                a：与正常组比较，P＜0.05；b：与PCOS组比较，P＜0.05；c：与ERI高
          缓冲液中裂解，使用BCA试剂盒定量蛋白质浓度，变性                          剂量组比较，P＜0.05。
          后电泳分离，转移到硝化纤维素膜上，用5%脱脂奶粉封                          3.3 ERI对大鼠卵巢组织形态学变化的影响

          闭；加入 Bax、Bcl-2、Caspase-3、LATS1、p-LATS1、YAP、            正常组大鼠卵巢颗粒细胞完整且排列规律，可见不
          p-YAP、TAZ一抗（稀释比例均为1∶1 000）和GAPDH（稀                 同阶段的卵泡、成熟卵母细胞和黄体。与正常组比较，
          释比例为 1∶5 000），在 4 ℃下孵育过夜，然后加入二抗                    PCOS 组大鼠卵巢呈多囊特征改变，可见严重闭锁性卵
         （稀释比例为1∶5 000），孵育1 h，以ECL显影；用Image J                泡和少量成熟卵泡及颗粒细胞层，囊性卵泡数量增加，


          中国药房  2024年第35卷第11期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 11    · 1341 ·
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