Page 27 - 《中国药房》2024年11期
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的比例进行合笼，持续饲养3 d（受孕比例约为80%），采                       CRFR2、VDAC1、α-tubulin一抗（稀释度分别为1∶2 000、
          用阴栓或阴道涂片查精子法确定雌鼠是否受孕，记录受                           1∶2 000、1∶2 000、1∶3 000），4 ℃孵育过夜；次日用TBST
          孕时间。受孕雌鼠按随机数字表法分组，分别为正常                            缓冲液洗涤后，加入二抗（稀释度为 1∶20 000），室温孵
          组、产后抑郁组和杜仲低、高剂量组（1.34、2.68 g/kg，以                  育 1 h；然后用 TBST 缓冲液洗涤后，使用 ECL 化学发光
          生药计相当于临床人用剂量的 6.25、12.5 倍），每组 10                   显影液显影。采用 Image J 软件分析，以目的蛋白与内
          只。产后抑郁组及杜仲各剂量组采用孕期旁观电击法，                           参蛋白（α-tubulin）的灰度值比值评价目的蛋白的表达
          在造模过程中使孕鼠旁观其它鼠被电击过程，使孕鼠身                           水平。
          处相似环境，通过视觉、听觉及嗅觉感受恐惧信息，诱导                          2.6 大鼠海马组织中细胞凋亡情况检测
          产后抑郁大鼠模型 。造模的同时，杜仲低、高剂量组大                              取各组大鼠海马组织，制备成单细胞悬液，分别按
                          [9]
          鼠每日按相应剂量灌胃杜仲水煎液，正常组及产后抑郁组                          照试剂盒说明书方法操作，采用流式细胞仪检测海马组
          大鼠每日灌胃生理盐水，给药体积均为4 mL，持续21 d。                      织中凋亡细胞比例和JC-1高电位细胞（正常细胞）比例。
          2.3 大鼠产后抑郁行为评价                                     2.7 大鼠海马组织形态观察
                        [10]
              按文献方法 对各组大鼠进行抑郁行为评价。                               取各组大鼠海马组织，用4%的多聚甲醛固定后，常
          2.3.1 一般情况                                         温保存，常规脱水、包埋、切片、苏木精-伊红（HE）染色，
              实验期间，记录各组大鼠的一般情况，主要包括体                         在显微镜下观察海马组织形态变化。
          重、毛色、饮食情况、精神状况等。                                   2.8 统计学方法
          2.3.2 行为学                                              采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计数资料用率
                                                                           2
             （1）旷场实验：于大鼠产后29～35 d进行实验，记录                    （%）表示，采用χ 检验。计量资料以x ˉ± s表示，多组间比
                                                             较采用单因素方差分析，组间方差齐性的两两比较采用
          大鼠垂直运动、水平运动、自我梳理得分。评分标准为：
                                                             LSD-t 检验，组间方差不齐的两两比较采用 Tamhane’s
          大鼠2只前爪不触碰箱壁站立为垂直运动，记1分；大鼠
                                                             检验。检验水准α＝0.05。
          4 只爪子进入方格为水平运动，记 1 分；大鼠完整梳毛 1
                                                             3 结果
          次为自我梳理，记1分。
                                                             3.1 大鼠一般情况比较
             （2）Morris 水迷宫实验：于大鼠产后 31～35 d 进行
          实验，包含定位巡航实验（产后31～34 d）和空间搜索实                           实验期间，与正常组比较，产后抑郁组大鼠表现出
                                                             食欲不振、体重减轻、精神萎靡、毛色暗淡无光等症状；
          验（产后35 d）。定位巡航实验是记录大鼠4 d内每天的
                                                             与产后抑郁组比较，杜仲低、高剂量组大鼠食欲、精神、
          逃避潜伏期；空间搜索实验是记录大鼠90 s内穿越平台
                                                             毛色均有所改善，体重有所增加。
          的次数和每次穿越时间。
                                                             3.2 大鼠行为学比较
             （3）糖水偏好实验：分别于孕前、孕20 d和产后30 d
                                                             3.2.1 旷场实验结果
          进行实验，计算并记录大鼠的糖水消耗比率。糖水消耗
                                                                 与正常组比较，产后抑郁组大鼠垂直运动、水平运
          比率（%）＝蔗糖消耗量/（蔗糖消耗量+自来水消耗量）×
                                                             动及自我梳理得分均显著降低（P＜0.05）；与产后抑郁
          100%。
                                                             组比较，杜仲低、高剂量组大鼠垂直运动、水平运动及自
          2.4 大鼠HPA轴激活水平评价和噬仔率计算
                                                             我梳理得分均显著升高（P＜0.05），结果见表1。
              为保证大鼠正常产仔养仔，本研究仅于大鼠孕20 d
                                                             表1 杜仲对产后抑郁大鼠旷场实验的影响（x±s，n＝
          时通过尾静脉取血，分离血清，按试剂盒说明书方法操
                                                                  10，分）
          作，检测各组大鼠血清中CORT水平。于产后35 d，仔鼠
                                                              组别           垂直运动得分      水平运动得分       自我梳理得分
          断奶后，取各组大鼠脑及血清，分别按试剂盒说明书方                            正常组           27.60±4.16  6.25±2.22   3.80±0.94
          法操作，检测下丘脑中CRF、UCN水平，垂体中ACTH水                        产后抑郁组         2.17±0.98 a  1.50±0.55 a  2.80±0.79 a
                                                              杜仲低剂量组        5.93±1.00 b  4.11±1.05 b  4.50±1.17 b
          平，以及血清中 CORT 水平；计算大鼠噬仔率，噬仔率                         杜仲高剂量组        8.00±2.16 b  7.25±1.71 b  3.11±0.93 b
         （%）＝噬仔只数/仔鼠总数×100%。                                    a：与正常组比较，P＜0.05；b：与产后抑郁组比较，P＜0.05。
          2.5 大鼠海马组织中 CRFR1、CRFR2 和 VDAC1 蛋白                 3.2.2 Morris水迷宫实验结果
          表达水平检测                                                 在定位巡航实验中，随着训练次数的增多，正常组
              采用 Western blot 法检测。分离各组大鼠海马组                  大鼠逃避潜伏期表现出缩短的趋势；产后抑郁组大鼠的
          织，裂解、离心后，取上清液，检测蛋白浓度；再以金属浴                         逃避潜伏期无缩短趋势。与正常组比较，产后抑郁组大
          变性，电泳，转膜，脱脂牛奶封闭 2 h，加入 CRFR1、                      鼠第 2～4 天的逃避潜伏期均显著延长（P＜0.05）；与产


          中国药房  2024年第35卷第11期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 11    · 1305 ·
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