Page 71 - 《中国药房》2024年10期

（2）内标溶液。精密称取槲皮素对照品5.00 mg，置 2.3.7 标准曲线绘制和定量下限考察
于10 mL容量瓶中，加入适量乙腈，超声溶解10 min，放 精密吸取空白血浆100 µL，分别加入“2.3.3”项下系

置至室温后，定容，摇匀，即得质量浓度为 500 µg/mL 的 列质量浓度的对照品溶液 20 µL，得到质量浓度分别为
槲皮素对照品储备液；取上述储备液适量，用乙腈稀释， 1 000、800、400、100、10、2、1 ng/mL 的校正标样。按照
得到质量浓度为1 µg/mL的内标溶液。 “2.3.5”项下方法处理后，再按照“2.3.1”和“2.3.2”项下条
2.3.4 空白血浆的处理 件进样分析，以木犀草素质量浓度为横坐标（x）、木犀草
精密吸取空白血浆 100 µL，加入乙腈 40 µL，涡旋 素与内标的峰面积比值为纵坐标（y）进行线性回归（权重
2
1 min，再加入乙腈 400 µL 沉淀蛋白，涡旋 5 min，静置 系数为1/x），得到木犀草素的标准曲线为y＝0.017 04x－
2
1 min后，离心（10 000 r/min，下同）10 min，取上清液，再 0.003 10（R ＝0.999 0），表明木犀草素检测质量浓度的线
离心10 min，取上清液100 µL，即得。 性范围为1～1 000 ng/mL，定量下限为1 ng/mL。
2.3.8 精密度和准确度试验
2.3.5 含药血浆的处理
取空白血浆 100 µL，加入已知含量的木犀草素对
精密吸取含药血浆 100 µL，加入“2.3.3（2）”项下内
照品溶液，按照“2.3.7”项下方法分别制备定量下限（1
标溶液20 µL和乙腈 20 µL，涡旋1 min，再加入乙腈 400
ng/mL）及低、中、高质量浓度（2、400、800 ng/mL）的质控
µL 沉淀蛋白，涡旋 5 min，静置 1 min 后，离心 10 min，取
样品，每个浓度各6份。按照“2.3.5”项下方法处理后，再
上清液，再离心10 min，取上清液100 µL，即得。
按照“2.3.1”和“2.3.2”项下条件进样分析，考察日内精密
2.3.6 专属性考察
度；连续测定 3 d，考察日间精密度；将实测质量浓度与
取 空 白 血 浆 、空 白 血 浆 + 木 犀 草 素 对 照 品（10
理论质量浓度进行比较，以相对误差（relative error，RE）
ng/mL）、血浆样品（给药 12 h 后取样），分别按照“2.3.4”
考察准确度。结果（表2）显示，日内、日间精密度试验的
和“2.3.5”项下方法处理后，再按照“2.3.1”和“2.3.2”项下
RSD 均不高于 18.7%，RE 为 2.6%～12.4%，表明该方法
条件进样分析，记录色谱图（图2）。结果显示，空白血浆
的准确度、精密度良好，均符合 2020 年版《中国药典》
中的内源性物质与其他物质对木犀草素的测定无
[6]
要求 。
干扰。
表2 Beagle犬血浆中木犀草素分析方法的精密度和准
1 600 1 000 确度试验结果
900
800
1 200 理论浓度/ 日内（n＝6） 日间（n＝3）
700
intensity 800 intensity 500 （ng/mL） 实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） RSD/% RE/% 实测质量浓度（x±s）/（ng/mL） RSD/% RE/%
600
400
300 1 1.14±0.15 13.2 9.3 1.07±0.20 18.7 7.4
400 2 2.20±0.27 12.2 10.2 2.07±0.23 11.1 2.6
200
100 400 436.90±15.12 3.5 9.2 407.44±50.44 12.4 3.0
0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0 800 899.36±28.17 3.1 12.4 868.60±105.36 12.1 11.0
t/min t/min
A.空白血浆 2.3.9 基质效应和提取回收率试验
10 000 350 000 取 6 份来源不同的空白血浆 100 µL，分别加入高、
木犀草素 300 000 内标
8 000
250 000 低质量浓度（800、2 ng/mL）的木犀草素对照品溶液 20
intensity 6 000 intensity 200 000 µL，按 照“2.3.5”项 下 方 法 处 理 后 ，再 按 照“2.3.1”和
150 000
4 000
100 000 “2.3.2”项下条件进样分析，记录峰面积（A）。取 6 份来
2 000
50 000
0 0 源不同的空白血浆 100 µL，加乙腈 400 µL 沉淀蛋白，涡
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0
t/min t/min 旋 5 min，分别加入高、低质量浓度（800、2 ng/mL）的木
B.空白血浆+木犀草素对照品（10 ng/mL）+内标
犀草素对照品溶液和内标溶液 20 µL，涡旋 1 min，静置
8 000 45 000
7 000 木犀草素 40 000 内标 1 min 后，离心 10 min，取上清液，按照“2.3.1”和“2.3.2”
6 000 35 000 项下条件进样分析，记录峰面积（B）。分别取高、低质量
30 000
5 000
intensity 4 000 intensity 25 000 浓度（800、2 ng/mL）的木犀草素对照品溶液20 µL，按照
20 000
3 000
2 000 15 000
10 000
1 000 5 000 “2.3.5”项下方法处理后，再按照“2.3.1”和“2.3.2”项下条
0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0.5 1.0 1.5 2.0 件进样分析，记录峰面积（C）。以B/C计算基质因子，以
t/min t/min
C.血浆样品+内标 A/B计算提取回收率，以木犀草素的基质因子/内标的基
图2 Beagle犬血浆中木犀草素和内标的MRM色谱图 质因子计算经内标归一化的基质因子。结果显示，在
中国药房 2024年第35卷第10期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 10 · 1217 ·