Page 77 - 《中国药房》2024年9期
P. 77
双冬胶囊的国内外研究报道较少，主要是定性鉴别、单 总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检
一成分的定量分析或药理作用研究等 [1―6] ，而双冬胶囊 测试剂盒（批号分别为081722221214、021423230302）购
具体是哪些成分发挥抗炎作用目前尚不明确。中药谱 自上海碧云天生物技术有限公司；前列腺素 E2 （prosta‐
效关系是在中药指纹图谱研究基础上，将中药指纹图谱 glandin E2，PGE2 ）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒、白
中化学成分的变化与中药药效联系起来，进而筛选出与 细 胞 介 素 6（interleukin-6，IL-6）ELISA 试 剂 盒 、IL-8
药效密切的成分 [7―8] 。鉴于此，本研究采用高效液相色 ELISA 试剂盒、IL-1β ELISA 试剂盒、肿瘤坏死因子 α
谱（HPLC）法建立双冬胶囊指纹图谱，并以抗炎作用为 （tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 试剂盒（批号均
切入点，将大鼠足肿胀率及炎症因子水平作为药效指 为 02/2023）均购自上海酶联生物科技有限公司；甲醇、
标，结合灰色关联度分析研究双冬胶囊指纹图谱与抗炎 乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；水为纯净水。
作用的谱效关系，以期从该药中筛选出与抗炎药效密切 2 方法与结果
相关的化学成分，为探索其药效物质基础和质量控制提 2.1 双冬胶囊指纹图谱的建立
供理论依据。 2.1.1 混合对照品溶液的制备
1 材料 取京尼平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、京尼平龙
1.1 主要仪器 胆双糖苷、绿原酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、西红花苷、毛
本研究所用的主要仪器有Ultimate 3000型HPLC仪 蕊异黄酮对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成对照
（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、MS105DU 型电子 品储备液。精密量取上述各对照品储备液适量，精密称
分析天平（瑞士 Mettler-Toledo 公司）、H1-16KR 型高速 取栀子苷对照品适量，置于同一 10 mL 量瓶中，加甲醇
冷冻离心机（湖南可成仪器设备有限公司）、ReadMax- 制得每 1 mL 含 30.6 μg 京尼平苷酸、133.3 μg 去乙酰车
1500型光吸收全波长酶标仪（上海闪谱生物科技有限公 叶草苷酸甲酯、297.8 μg 京尼平龙胆双糖苷、34.5 μg 绿
司）、T10 basic型组织分散机[艾卡（广州）仪器设备有限 原酸、12.7 μg 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、85.0 μg 西红花苷、
公司]。 3.5 μg 毛蕊异黄酮、1 408.0 μg 栀子苷的混合对照品
1.2 实验动物 溶液。
本研究所用动物为雄性SD大鼠，体重（190±10） g， 2.1.2 供试品溶液的制备
购自长沙市天勤生物技术有限公司，实验动物生产许可 取双冬胶囊内容物约 2 g，精密称定，置于 50 mL 具
证号为 SCXK（湘）2022-0011。大鼠饲养于贵州医科大 塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇30 mL，称定质量；超声
学药学院动物房内，温度为（24±2） ℃，相对湿度为 （频率40 kHz，功率250 W）提取20 min后取出，放冷，再
（55±2）%。所有动物实验操作均符合贵州医科大学动 次称定质量；用 50% 甲醇补足减失的质量，摇匀，采用
物实验福利伦理审查委员会标准，实验动物伦理号为 0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
2200394。 2.1.3 色谱条件
1.3 主要药品及试剂 本研究所用色谱柱为 ACE C18-AR（250 mm×4.6
双 冬 胶 囊（批 号 分 别 为 20210903、20211004、 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.1％磷酸溶液（B）为流动相，进
20211101、20211122、20211203、20211224、20220101、 行 梯 度 洗 脱（0～20 min，4%A→25%A；20～25 min，
20220112、20220123、20220202、20220213、20220224、 25%A→28%A；25～40 min，28%A→38%A）；检测波长
20220305、20221001、20221013，编号依次为S1～S15，规 为 235 nm（0～22 min）、440 nm（22～28 min）、250 nm
格均为0.3 g/粒）购自贵州远程制药有限责任公司；京尼 （28～40 min）；柱温为30 ℃；流速为1 mL/min；进样量为
平苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、绿 10 μL。
原酸、栀子苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、西红花苷、毛蕊异 2.1.4 精密度试验
黄酮对照品（批号分别为 wkq22041210、wkq20052505、 取“2.1.2”项 下 供 试 品 溶 液（样 品 编 号 S10），按
wkq22060614、wkq20042702、wkq20011502、wkq20010904、 “2.1.3”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录色谱图。
wkq22042612、wkq21122903，纯度≥98%）购自四川维克 选取峰 9（京尼平龙胆双糖苷）作为参照峰，以此计算各
奇生物科技有限公司；阿司匹林肠溶片（批号 BJ70397， 共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果显示，
规格100 mg/粒）购自拜耳医药保健有限公司；BCA蛋白 各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.14%～0.67%（n＝
浓度测定试剂盒（批号 20220914）购自北京索莱宝科技 6），相对峰面积的RSD为0.44%～2.92%（n＝6），表明仪
有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂盒、 器精密度良好。
中国药房 2024年第35卷第9期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 9 · 1095 ·
