Page 43 - 《中国药房》2024年9期
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in  methimazole  group （P＜0.01  or  P＜0.05）. Above  five  differential  metabolites  were  mainly  involved  in  four  signaling  pathways:
          pentose  and  glucuronate  interaction，  lysine  degradation，  cysteine  and  methionine  metabolism，  and  pyrimidine  metabolism.
          CONCLUSIONS  Methimazole  might  improve  hyperthyroidism  by  modulating  the  four  pathways  of  pentose  and  glucuronate
          interaction， lysine degradation， cysteine and methionine metabolism， and pyrimidine metabolism.
          KEYWORDS    methimazole； hyperthyroidism； urine metabolomics； differential metabolites； UPLC-TOF-MS



              甲状腺功能亢进症（简称“甲亢”）是由多种病因导                        1.3 实验动物
          致的甲状腺功能增强、甲状腺激素分泌过多，以甲状腺                               本研究所用动物为SPF级雄性SD大鼠，共30只，体
          肿大、多食易饥、体重减轻以及三碘甲腺原氨酸（triiodo‐                     重 160～180 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公
          thyronine，T3 ）、四碘甲腺原氨酸（tetraiodothyronine，T4 ）     司，动物生产许可证号为SCXK（湘）2019-0004。大鼠自
          分泌过多症候群（包括高代谢症候群及心血管、消化、骨                          由摄食饮水，饲养于温度（22±1） ℃、相对湿度 50%、每
          骼肌肉系统症状）为主要临床表现，可见胫前黏液水肿、                          12 h 光照/黑暗交替的环境下。本研究方案经江西中洪
                        [1]
          指端粗厚等症状 。甲亢是全球内分泌与代谢病领域较                           博元生物技术有限公司实验动物伦理委员会批准后实
          常见的疾病之一，仅次于糖尿病，在我国的发病率呈逐年                          施（批准号为2021062701）。
          上升趋势，给患者家庭和社会带来沉重负担 。                              2 方法
                                             [2]
              现代临床治疗甲亢主要以服用抗甲状腺药物和手
                                                             2.1 甲巯咪唑改善甲亢的药效学考察
                          [3]
          术切除甲状腺为主 。甲巯咪唑是我国临床治疗甲亢的
                                                             2.1.1 动物分组、造模与给药
          一线药物，可通过抑制 T4合成的关键酶，即甲状腺过氧
                                                                 将30只SD大鼠置于代谢笼中适应性喂养7 d后，按
          化物酶（thyroid peroxidase，TPO），从而减少 T4的生成，            体重均衡原则分为对照组、模型组和甲巯咪唑组，每组
                                                 [4]
          进而有效减轻患者症状并恢复其甲状腺功能 ，但甲巯
                                                             10 只。模型组和甲巯咪唑组大鼠每天按 160 mg/kg（剂
          咪唑治疗甲亢的分子机制尚不明确。
                                                             量为临床等效剂量）灌胃左甲状腺素钠片混悬液，90 min
              代谢组学是系统生物学研究的重要方法，可鉴别生
                                                             后甲巯咪唑组大鼠按 3.6 mg/kg（剂量为临床等效剂量）
          物体在特定刺激或某种因素影响下产生的潜在代谢物，
                                                             灌胃甲巯咪唑片混悬液，对照组大鼠灌胃等体积的生理
          并有助于确定代谢物及相关代谢通路的变化情况 。尿
                                                    [5]
                                                             盐水，每天1次，连续15 d。
          液可快速反映机体状态，同时对机体的正常生理活动至
                                                             2.1.2 大鼠基本情况变化考察
          关重要，加之其检测简单、无创，故已成为临床常规的生
                                                                 每天观察大鼠的精神状态、毛发色泽、饮食量、大便
          物样本，被广泛用于非靶向代谢组学研究。基于此，本
                                                             性状和死亡等情况，并记录其肛温、体重变化。
          研究基于超高效液相色谱-飞行时间质谱（UPLC-TOF-
                                                             2.1.3 大鼠血清生化指标检测
          MS）技术，对甲巯咪唑干预后的甲亢大鼠进行尿液代谢
                                                                 末次给药 24 h 后，各组大鼠腹主动脉取血，离心
          组学分析，旨在从尿液角度揭示甲巯咪唑治疗甲亢的作
                                                            （3 500 r/min，15 min）得血清，严格按照相关试剂盒说明
          用机制。
          1 材料                                               书操作，检测各组大鼠血清中T3、T4、TSH、FT3、FT4水平。
                                                             2.2 大鼠尿液样品的代谢组学分析
          1.1 主要仪器
                                                             2.2.1 尿液样本处理
              本研究所用的主要仪器有 Acquity  UPLC 仪、Pre‐
                                           TM
                                                                 于给药第15天收集各组大鼠24 h尿液，用于代谢组
          mier LCT XE 型 TOF-MS 仪（美国 Waters 公司），KDC-
                                                             学 分 析 。 尿 液 样 本 于 4  ℃ 下 离 心（12  000  r/min，10
          160HR 型高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司），
          Milli-Q 型超纯水系统（美国 Millipore 公司），BT-3000 型          min），取上清液至－80 ℃条件下储存。检测前，将冻融
          电子天平（启东友洺衡器有限公司）等。                                 的尿液于 4 ℃下离心（13 000 r/min，10 min），将上清液
          1.2 主要药品与试剂                                        转移至 1.5 mL 离心管中，然后用 0.22 μm 微孔滤膜过
              左甲状腺素钠片（批号H20140052，规格50 μg/片），                滤，取滤液进行UPLC-TOF-MS检测。
          甲巯咪唑片（批号 010011428，规格 10 mg/片）均购自德                 2.2.2 色谱与质谱条件
                                                                                  ®
          国 Merck 公司；T3检测试剂盒（批号 190815）、T4检测试                    以 ACQUITY UPLC  BEH C18 （2.1 mm×50 mm，1.7
          剂盒（批号 190706）、促甲状腺激素（thyroid stimulating           µm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.05%甲酸溶液（B）为流动相
          hormone，TSH）检测试剂盒（批号 190302）、游离三碘甲                 进行梯度洗脱（0～15 min，2%A→100%A；15～17 min，
          腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3 ）检测试剂盒（批号           100%A；17～18 min，100%A→2%A；18～20 min，2%A）；
          190518）、游离四碘甲腺原氨酸（free tetraiodothyronine，         流速为0.4 mL/min；柱温为40 ℃；进样量为2 µL。
          FT4 ）检测试剂盒（批号 190621）均购自南京建成生物工                        采用电喷雾离子源（electron spray ionization，ESI）
                                                                                                   TM
          程研究所有限公司。                                          进行正、负离子模式检测，并采用 LockSpray 校正系统

          中国药房  2024年第35卷第9期                                                China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 9    · 1065 ·
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