Page 23 - 《中国药房》2024年9期

protein expression of DGAT were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01）； the levels of SOD， protein expressions of PPARα
and CPT-1 were significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01）. As the results showed in vitro， after treatment with 3， 6 and 12 μmol/L
of marein， the lipid accumulation of hepatocytes was significantly inhibited， and the levels of TG and MDA， protein expression of
DGAT were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01）， while the levels of SOD， protein expressions of PPARα and CPT-1 were
significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01）. After MK886 pretreatment， the effects of marein on the above protein expressions
were abolished. CONCLUSIONS Marein might exert a protective effect against AFL. The mechanisms might be related to
inhibiting oxidative stress-mediated injury and improving PPARα-mediated lipid metabolism signaling pathway.
KEYWORDS marein； alcoholic fatty liver； oxidative stress； lipid metabolism； PPARα

长期大量饮酒会引起酒精性脂肪肝（alcoholic fatty hyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，
liver，AFL） 。AFL 的发病机制非常复杂，由多种因素 SOD）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号分别
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共同参与。其中，氧化应激和脂代谢异常在AFL的发生 为 20230403、20230412、20230415、20230514），兔 源
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发展过程中具有重要作用 。过氧化物酶体增殖物激 PPARα 抗体、兔源肉碱棕榈酰转移酶 1（carnitine palmi‐
活 受 体 α（peroxisome proliferator-activated receptor α， toyltransferase-1，CPT-1）抗体、兔源二脂酰甘油酰基转移
PPARα）是抑制肝脏脂质生成的关键蛋白，上调 PPARα 酶（diacylgly- cerol acyltransferase，DGAT）抗体和兔源β-
[3]
表达可以改善肝脏的脂代谢异常，减轻脂肪堆积 。研 肌动蛋白（β-actin）抗体（英国 Abcam 公司，批号分别为
究表明，AFL的发生可能与PPARα调控的脂代谢通路抑 ab314112、ab220789、ab100982、ab8226），辣根过氧化物
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制密切相关 。 酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（武
马里苷的化学名为奥卡宁-4′-O-葡萄糖苷，是一种 汉Proteintech公司，批号SA02502），ECL化学发光液（上
查尔酮类化合物，在两色金鸡菊头状花序的水和乙醇提 海天能生命科学有限公司，批号180-5001）。
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取部位中含量最高 。近年来国内外研究发现，马里苷 1.3 动物
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具有较多有益的药理活性，如改善糖脂代谢 、抗炎和抗 实验动物为 SPF 级健康雄性昆明小鼠，共 37 只，体
[7]
氧化应激 等。同时有研究表明，马里苷可减缓糖尿病 重 20～22 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，
所造成的肝脏损伤 。本课题组前期研究已经证实，在 实验动物生产许可证号为 SCXK（沪）2022-0004。小鼠
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缺氧诱导的心肌肥大细胞中，马里苷可以通过上调PPARα 购入后，饲养于苏州大学 SPF 级动物房内，饲养环境温
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的表达进而改善其脂代谢异常 。鉴于马里苷对肝损伤 度为（22±2） ℃、相对湿度为 55%、12 h 光照/12 h 黑暗
的减缓作用以及其抗氧化应激和改善 PPARα 介导的脂 循环。实验动物所有操作均严格按照苏州大学动物伦
质代谢异常的药理活性，本研究拟通过建立体内和体外 理委员会标准执行（伦理批件号：SUDA20230622A01）。
AFL 模型，探讨马里苷对 AFL 的影响，并从氧化应激和 1.4 细胞
PPARα 介导的脂质代谢 2 个角度探究其抗 AFL 的可能 大鼠 BRL 肝细胞购自中国科学院细胞库。将细胞
作用机制，为进一步研究马里苷的药理作用提供参考。 接种于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL
1 材料 链霉素的RPMI 1640培养基中，并在饱和湿度、5%CO2、
1.1 主要仪器 37 ℃培养箱中培养。
本研究所用的主要仪器有：Infinite M1000 Pro 型全 2 方法
波长多功能酶标仪（瑞士 Tecan 公司），FJ-200 型高速分 2.1 动物实验
散均质机（美国 LI-COR 公司），Power PAC 2000 型电泳 2.1.1 小鼠AFL模型建立及分组、给药
仪、ChemiDoc XRS 型自动凝胶成像系统、电泳槽（美国 在进行正式实验前，小鼠进行环境适应性饲养2 d。
Bio-Rad 公司），Fresco 21 型高速微量台式冷冻离心机 然后按体重将小鼠随机分为正常对照组（n＝9）、模型组
（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），CX31 型倒置显微 （n＝10）和马里苷75、150 mg/kg组（n＝9，给药剂量根据
镜（日本Olympus公司）。 相关文献报道 [10―11] 及本课题组前期预实验结果确定；以
1.2 主要药品与试剂 0.5%羧甲基纤维素钠溶液为溶剂进行药液配制，马里苷
本研究所用的主要药品与试剂有：马里苷标准品 母液质量浓度分别为3.75、7.5 mg/mL）。马里苷75、150
（上海源叶生物科技有限公司，批号 B29210，纯度≥ mg/kg 组小鼠灌胃相应剂量的马里苷药液（0.02 mL/g），
98%），MK886（PPARα 抑制剂）标准品（上海 Med Chem 正常对照组和模型组小鼠灌胃等体积0.5%羧甲基纤维
Express 公司，批号 HY-14166，纯度≥99.7%），高度白酒 素钠溶液，每天 1 次，持续 30 d。每天完成给药 30 min
（北京红星股份有限公司，酒精度：52%vol），油红O染色 后，模型组和各给药组小鼠均采用高度白酒灌胃30 d的
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试剂盒（德国Sigma公司，批号MAK194），考马斯亮蓝蛋 方法建立 AFL 小鼠模型 ：初始灌胃剂量为 0.01 mL/g，
白、甘油三酯（triglyceride，TG）、丙二醛（malondialde‐ 并在7 d内将剂量逐渐加大到0.015 mL/g；正常对照组小

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