Page 26 - 《中国药房》2024年9期

3.2.4 马里苷对肝细胞 PPARα、CPT-1 和 DGAT 蛋白表 表5 MK886干预后肝细胞中PPARα、CPT-1和DGAT
达的影响 蛋白表达水平测定结果（x±s，n＝3）
与正常对照组比较，模型组细胞中 PPARα、CPT-1 组别 PPARα/β-actin CPT-1/β-actin DGAT/β-actin
蛋白表达水平显著降低（P＜0.01），DGAT蛋白表达水平 正常对照组 1.03±0.11 0.72±0.19 1.15±0.08
模型组 0.38±0.05 a 0.30±0.11 a 1.95±0.06 a
显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，模型+1‰DMSO
模型+MK886组 0.23±0.05 a 0.20±0.02 a 2.07±0.08 a
组细胞中上述指标水平差异均无统计学意义（P＞ 模型+MK886+马里苷12 μmol/L组 0.23±0.05 0.21±0.03 1.93±0.09
0.05）；马里苷3、6、12 μmol/L组细胞中PPARα、CPT-1蛋 a：与正常对照组比较，P＜0.01。
白表达水平显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01），DGAT 蛋白 4 讨论
表达水平显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。结果见图 4 乙醇可能会影响肝脏脂质代谢，并导致肝脏脂质蓄
和表4。 积和脂肪变性 [15―16] 。在本研究中，动物实验采取小鼠连
续灌胃高度白酒 30 d，细胞实验采取 0.5% 乙醇、0.01%
PPARα 52 kDa
硫酸亚铁和 0.1 μmol/L 油酸诱导大鼠 BRL 肝细胞损伤
CPT-1 88 kDa
来进行药效研究。结果显示，在动物和细胞模型中均检
DGAT 55 kDa 测到肝细胞中TG水平显著增加，而在给予马里苷后，细
胞中 TG 水平均显著下降，表明马里苷可拮抗乙醇引起
β-actin 42 kDa
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ 的肝脏脂肪堆积。
Ⅰ：正常对照组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：模型+1‰ DMSO组；Ⅳ：马里苷3 研究表明，乙醇蓄积可导致活性氧自由基的大量产
μmol/L组；Ⅴ：马里苷6 μmol/L组；Ⅵ：马里苷12 μmol/L组。 生，进而诱发机体的氧化应激和脂质过氧化反应，最终
图4 各组细胞中PPARα、CPT-1、DGAT蛋白表达的电
导致肝细胞损伤。而乙醇蓄积不但会引起活性氧自由
泳图
[17]
基的大量产生，还会降低机体的抗氧化能力 。在本研
表4 各组细胞中PPARα、CPT-1、DGAT蛋白表达水平 究中，笔者检测了小鼠肝组织中MDA、SOD水平。结果
测定结果（x±s，n＝3） 发现，在马里苷作用后，小鼠肝组织中MDA水平显著降
组别 PPARα/β-actin CPT-1/β-actin DGAT/β-actin 低，SOD水平显著升高；同时，在乙醇诱导的肝细胞中也
正常对照组 0.78±0.05 0.23±0.05 0.20±0.02 检测到马里苷的上述作用。由此可知，马里苷可通过提
模型组 0.25±0.05 a 0.12±0.02 a 1.02±0.09 a
模型+1‰DMSO组 0.33±0.06 0.11±0.02 1.13±0.10 高机体的抗氧化酶水平，增加对活性氧自由基的清除能
马里苷3 μmol/L组 0.59±0.04 b 0.16±0.01 b 0.78±0.09 b 力，从而减轻氧化应激引起的肝损伤。
马里苷6 μmol/L组 0.60±0.09 b 0.18±0.02 c 0.64±0.08 c PPARα是调节脂质代谢的一种重要的转录因子，主
马里苷12 μmol/L组 0.75±0.04 c 0.20±0.01 c 0.27±0.05 c
[18]
要在肝脏表达 。在乙醇蓄积的情况下，肝组织中
a：与正常对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模
型组比较，P＜0.01。 PPARα 表达被抑制，从而导致脂质代谢异常，使肝脏受
[3]
3.2.5 MK886 干 预 后 马 里 苷 对 乙 醇 损 伤 肝 细 胞 中 损 。PPARα 可通过调控其靶基因 CPT-1 和 DGAT 表
PPARα、CPT-1和DGAT蛋白表达的影响 达，在肝脏脂质代谢中发挥重要作用 [19―20] 。CPT-1 是调
与正常对照组比较，模型组和模型+MK886 组细胞 控脂肪酸β氧化的关键酶，DGAT则是调控TG合成的关
中 PPARα、CPT-1 蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）， 键酶，这2种酶的异常表达会导致脂质合成增加。在本
DGAT 蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）。与模型组比 研究中，动物实验和细胞实验结果均表明，乙醇诱导肝
较，模型+MK886+马里苷 12 μmol/L 组细胞中上述指标 细胞损伤后会抑制PPARα蛋白表达，且CPT-1蛋白表达
水平差异均无统计学意义（P＞0.05），表明在用 MK886 也随之下调，但 DGAT 蛋白表达却上调，这表明 PPARα
预处理后，马里苷对乙醇诱导肝细胞中 PPARα、CPT-1 参与了乙醇引起的肝脂质代谢紊乱；而马里苷可上调乙
和DGAT蛋白表达的影响消失。结果见图5、表5。 醇诱导肝细胞中PPARα、CPT-1蛋白的表达，下调DGAT
蛋白的表达。为了进一步验证马里苷对 PPARα 的靶向
PPARα 52 kDa
调控作用，本研究在采用 MK886 对肝细胞进行预处理
CPT-1 88 kDa 后，观察到马里苷对细胞中PPARα、CPT-1和DGAT的调
控作用被阻断，证实了马里苷改善乙醇诱导肝脏脂肪变
DGAT 55 kDa
性的作用可能是通过调控PPARα信号通路实现的。
β-actin 42 kDa
综上所述，马里苷对 AFL 具有保护作用，其作用机
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
Ⅰ：正常对照组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：模型+MK886组；Ⅳ：模型+ 制可能为增加肝脏的 SOD 水平以抑制乙醇引起的氧化
MK886+马里苷12 μmol/L组。 应激，也可能是通过增强PPARα的表达进而调控其介导
图5 MK886干预后肝细胞中PPARα、CPT-1和DGAT 的脂质代谢相关靶蛋白 CPT-1 和 DGAT 的表达，但其更
蛋白表达的电泳图 多的作用机制仍待进一步研究。

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