Page 63 - 《中国药房》2024年8期
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钠30 mg/kg麻醉，随机选取60只，固定后行气管插管，并                     2.6 大鼠心肌组织病理变化观察
          连接小动物呼吸机和动物心电图机；开胸，于大鼠第3、4                             另取“2.5”项下固定的大鼠心肌组织适量，行常规石

          肋间分离肌肉后暴露心脏，在左冠状动脉前降支下方                            蜡包埋、切片（厚约5 μm），经HE染色后，使用显微镜观
          2～3 mm处作结扎处理。若大鼠心肌部分发白、收缩能                         察其心肌组织的病理变化。
          力变弱、心电图显示Ⅱ导联 ST 段抬高 0.2 V，表明 AMI                   2.7 大鼠血清中BNP、cTnⅠ水平检测
                      [9]
          模型构建成功 。取剩余 15 只大鼠，仅进行开/关胸操                            取“2.4”项下冻存的各组大鼠血清样品，严格按照相
          作，不作左冠状动脉前降支结扎，作为假手术组（Sham                         应ELISA试剂盒说明书方法操作，使用酶标仪检测其血
                                                  5
          组）。术后，所有大鼠尾静脉注射青霉素 1×10 单位/d，                      清中BNP、cTnⅠ水平。
          连续注射3 d。                                           2.8 大鼠心肌组织中collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、MMP-2、
                                                             SphK1、S1P蛋白表达情况检测
          2.2 动物分组与干预
                                                                 取每组剩余5只大鼠，摘除其心脏，冻存。取上述冻
              将造模成功的60只大鼠（均成功，无死亡）随机分为
                                                             存的心肌组织适量，使用 RIPA 裂解液提取总蛋白并使
          AMI 模型组（Model 组）和低剂量 ALF 组（ALF-L 组，予
                                                             用 BCA 法定量。取上述蛋白，经加热变性后进行十二
                       [10]
          0.25 mg/kg ALF ）、高剂量 ALF 组（ALF-H 组，予 0.5
                                                             烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，并转移至聚偏
          mg/kg ALF ）、高剂量 ALF+SphK1 激活剂组（ALF-H+
                   [10]
                                                             二氟乙烯膜上，以胎牛血清于37 ℃下封闭2 h；加入col‐
                                                 [11]
          K6PC-5 组，予 0.5 mg/kg ALF+1 μg/g K6PC-5 ），每组
                                                             lagen Ⅰ、collagen Ⅲ、MMP-2、SphK1、S1P、GAPDH一抗
          15只。各药物组大鼠腹腔注射相应药液（以生理盐水为
                                                            （稀释比例均为1∶1 000），于4 ℃下孵育过夜；加入相应
          溶剂），Sham组和Model组大鼠腹腔注射生理盐水（注射
                                                             二抗（稀释比例为1∶3 000），于室温下孵育2 h；使用ECL
          体积与ALP各剂量组相同），每天1次，连续4周。
                                                             化学发光剂显影，并置于凝胶成像仪下成像。采用 Im‐
          2.3 大鼠心功能检测
                                                             age Lab 软件，以 GAPDH 为内参，对目的蛋白的表达情
              末次给药 12 h 后，所有大鼠腹腔注射 1% 戊巴比妥
                                                             况进行定量。
          钠 30 mg/kg 麻醉，采用彩色多普勒动物超声诊断仪（探
                                                             2.9 统计学方法
          头频率 15 MHz）检测其左室收缩压（left ventricular sys‐
                                                                 采用 Graph Pad Prism 7.0 软件对数据进行统计分
          tolic  pressure，LVSP）、左 室 射 血 分 数（left  ventricular
                                                             析。计量数据以x±s表示，多组间比较采用单因素方差
          ejection fraction，LVEF）、左室收缩期内径（left ventricu‐
                                                             分析，进一步两两比较采用 LSD-t 检验。检验水准
          lar systolic diameter，LVSD）、左室短轴缩短率（left ven‐      α＝0.05。
          tricular fractional shortening，LVFS）。              3 结果
          2.4 大鼠心肌梗死情况检测                                     3.1 ALF对大鼠心功能的影响
              心脏功能检测完成后，所有大鼠于腹主动脉取血，                             与 Sham 组比较，Model 组大鼠 LVSP、LVFS、LVEF

          血样于4 ℃下放置2 h后低温离心10 min，取上层血清，                     均显著降低，LVSD 显著升高（P＜0.05）。与 Model 组比
          分装并保存于－80 ℃下，待检。随机选取每组 5 只大                        较，ALF-H组大鼠LVSP、LVFS、LVEF均显著升高，且上
          鼠，摘除其心脏，沿冠状面制作切片（厚约 5 μm），严格                       述指标均显著高于 ALF-L 组；其 LVSD 显著降低，且该
          按照 TTC 染色试剂盒说明书方法操作。使用显微镜观                         指标显著低于 ALF-L 组（P＜0.05）。与 ALF-H 组比较，
          察其心肌梗死情况，并使用 Image pro 软件检测其心肌                     ALF-H+K6PC-5组大鼠LVSP、LVFS、LVEF均显著降低，
          梗死面积。                                              LVSD 显 著 升 高（P＜0.05）。 结 果 见 表 1（1  mmHg＝
          2.5 大鼠心肌纤维化程度检测                                    0.133 kPa）。
              随机选取每组另 5 只大鼠，摘除其心脏并置于 4%                         表1 各组大鼠心功能指标的比较（x±s，n＝15）
          多聚甲醛中固定。取上述固定的心肌组织适量，行常规                            组别        LVSP/（mmHg）  LVFS/%  LVSD/mm   LVEF/%
                                                              Sham组     158.46±6.63  57.33±6.05  32.82±3.16  85.94±6.50
          石蜡包埋、切片（厚约5 μm），严格按照Masson染色试剂
                                                              Model组     96.35±3.78 a  30.27±3.49 a  54.69±4.75 a  48.21±4.86 a
          盒说明书方法操作。封片后，使用显微镜观察其心肌纤                            ALF-L组     99.72±4.08  32.50±3.37  52.18±4.41  50.42±5.28
                                                              ALF-H组    142.18±7.20 bc  52.06±5.34 bc  36.45±3.55 bc  78.38±7.40 bc
          维化改变并拍照，通过 Image J 软件计算其胶原容积分
                                                              ALF-H+K6PC-5组  115.93±6.15 d  36.49±3.32 d  49.52±4.63 d  58.22±5.57 d
          数（collagen volume fraction，CVF），即蓝色胶原阳性区              a：与Sham组比较，P＜0.05；b：与Model组比较，P＜0.05；c：与ALF-
          域面积占组织总面积的百分比。                                     L组比较，P＜0.05；d：与ALF-H组比较，P＜0.05。


          中国药房  2024年第35卷第8期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 8    · 957 ·
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