Page 37 - 《中国药房》2024年7期
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（3）重复性试验：按“2.1.3”项下方法平行制备供试                     黄酚]和 327 nm（葛根素、绿原酸、3，5-二-O-咖啡酰奎宁
          品溶液（批号 221205）6 份，按“2.1.1”项下色谱条件进样                 酸、连翘酯苷A）外，其他条件同“2.1.1”项。
          分析，以黄芩苷色谱峰为参照，计算得各共有峰相对保                           2.2.2 系列混合对照品溶液的制备
          留时间的 RSD≤0.12%，相对峰面积的 RSD≤3.5%（n＝                      按“2.1.2”项下方法制备除柴胡皂苷 a、汉黄芩素外
          6），表明该方法的重复性良好。                                    的混合对照品溶液，再取上述溶液 0、0.2、0.5、1.0、5.0、
             （4）HPLC 指纹图谱的建立及相似度分析：取 13 批                    10.0 mL 置于 10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，
          小儿热速清口服液，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶                        即得各成分系列质量浓度混合对照品溶液①、②、③、
          液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图并                       ④、⑤、⑥。
          导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，设                       2.2.3 供试品溶液的制备
          置编号 S2 样品指纹图谱（峰数最多）为参照，将时间窗                            供试品溶液的制备同“2.1.3”项下。
          宽度设为0.1 min，使用平均数法进行多点校正，得到13                      2.2.4 阴性供试品溶液的制备
          批供试品溶液叠加的HPLC指纹图谱和对照指纹图谱R                              按照 2020 年版《中国药典》（一部）收载的本品处方
         （见图1），并进行相似度评价。结果显示，13批小儿热速                         组成和制备工艺，分别制成缺柴胡、缺板蓝根、缺金银
          清口服液样品指纹图谱与其对照指纹图谱 R 的相似度                          花、缺连翘、缺黄芩、缺葛根和缺大黄的阴性样品，再按
          均大于0.97，表明各批次小儿热速清口服液的相似性较                        “2.2.3”项下方法制备相应的阴性供试品溶液。
          好，整体质量差异不大。以分离度较好、峰面积较大的黄                          2.2.5 专属性试验及峰纯度检测
          芩苷色谱峰为参照，得到 13 批小儿热速清口服液中 14                           精密吸取混合对照品溶液④、供试品溶液、阴性供
          个共有峰相对保留时间的RSD为0.02%～0.13%（n＝13），                  试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱
          相对峰面积的 RSD 为 1.2%～29.4%（n＝13），表明各批                 图。结果见图 2。由图 2 可知，在与对照品溶液各成分
          次小儿热速清口服液在部分成分的含量上存在差异。                            相应的色谱图位置上，供试品溶液色谱图中均有相同保
           3 400       3               8                     留时间的色谱峰；阴性供试品溶液色谱图在对应保留时
           3 200              5
           3 000    1                   9  10  11
           2 800     2  4       6 7           12  13  14     间处未见相应检测成分的色谱峰，不干扰含量测定，表
           2 600                                        R
           2 400                                        S13  明该方法的专属性良好。供试品溶液中检测的各成分
           2 200                                        S12
           2 000                                        S11
           mAU  1 800                                   S10  均达到基线分离，分离度均大于1.0，理论板数以各成分
           1 600
                                                        S9
           1 400                                        S8
           1 200                                        S7   峰计，均不低于5 000。同时，采用二极管阵列检测器对
           1 000                                        S6
            800                                         S5   各成分色谱峰进行紫外光谱扫描和峰纯度检测发现，12
            600                                         S4
            400                                         S3
            200                                         S2   种成分的紫外吸收光谱和相应对照品完全一致，峰纯度
             0                                          S1
               0          4        8        12       16       20         24       28      32        36       40        44       48       52        56      60        64      68           72          76  因子均大于1 000。
                                  t/min
                                                             2.2.6 线性关系考察
             1：（R，S）告依春；2：3，5-二-O-咖啡酰奎宁酸；3：葛根素；4：柴胡皂
         苷a；5：连翘苷；6：连翘酯苷A；7：绿原酸；8：黄芩苷；9：柴胡皂苷d；10：                分别取系列混合对照溶液，按“2.2.1”项下色谱条件
         汉黄芩苷；11：黄芩素；12：大黄素；13：汉黄芩素；14：大黄酚。                  进样测定，记录峰面积。以待测成分峰面积（Y）对质量
         图1 13批小儿热速清口服液样品的HPLC叠加指纹图                          浓度（X）进行线性回归，结果见表1。
               谱与对照指纹图谱R                                     2.2.7 精密度试验
             （5）共有峰归属与确认：精密吸取“2.1.2”项下混合                         取混合对照品溶液④，按“2.2.1”项下色谱条件连续
          对照品溶液和“2.1.3”项下供试品溶液，按“2.1.1”项下色                   进样测定 6 次，记录峰面积，计算得（R，S）告依春、3，5-
          谱条件进样测定，通过保留时间和紫外吸收光谱定性，                           二-O-咖啡酰奎宁酸、葛根素、连翘苷、连翘酯苷A、绿原
          确定小儿热速清口服液 HPLC 指纹图谱各共有峰的归                         酸、黄芩苷、柴胡皂苷d、汉黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄
          属。结果显示，共确认14个共有成分，其中1号峰为（R，                        酚峰面积的 RSD 分别为 0.49%、0.37%、0.26%、0.45%、
          S）告依春，2号峰为3，5-二-O-咖啡酰奎宁酸，3号峰为葛                     0.38%、0.56%、0.39%、0.47%、0.58%、0.67%、0.71%、
          根素，4 号峰为柴胡皂苷 a，5 号峰为连翘苷，6 号峰为连                     0.74%（n＝6），表明仪器精密度良好。
          翘酯苷A，7号峰为绿原酸，8号峰为黄芩苷，9号峰为柴                         2.2.8 稳定性试验
          胡皂苷d，10号峰为汉黄芩苷，11号峰为黄芩素，12号峰                           按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液（批号221205），
          为大黄素，13号峰为汉黄芩素，14号峰为大黄酚。                           于室温放置 0、4、8、12、18、24、36 h 后，按“2.2.1”项下色
          2.2 指标成分含量测定                                       谱条件进样测定，记录峰面积，计算得各指标成分峰面
          2.2.1 色谱条件                                         积 RSD 分 别 为 0.97%、0.75%、0.43%、0.47%、0.44%、
              除检测波长为 210 nm（柴胡皂苷 d）、254 nm[连翘                0.53%、0.37%、1.12%、0.97%、1.38%、1.62%、1.79%（n＝
          苷、（R，S）告依春、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、大黄素、大                      6），表明供试品溶液在室温放置36 h内稳定性良好。


          中国药房  2024年第35卷第7期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 7    · 803 ·
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