Page 57 - 《中国药房》2024年5期

2.2.5 线性关系考察
精密吸取“2.2.2”项下混合对照品溶液 1、2、5、10、
15、20 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
积。以各待测成分的进样量（X）为横坐标、对应峰面积
（Y）为纵坐标建立回归方程，得到各成分的线性关系考
察结果，详见表1。
表1 紫九牛中4种化学成分的线性关系考察结果
成分 回归方程 r 线性范围/μg
pleuropyrone A Y＝3 990 420.89X－42 750.43 0.999 7 0.028 1～0.561 6 0.123 0 0.189 0.180 0.373 102.22
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 Y＝3 068 138.36X－21 006.97 0.999 6 0.018 0～0.360 8 0.110 8 0.170 0.180 0.349 99.44
欧鼠李苷A Y＝2 268 099.04X－13 734.12 0.999 6 0.013 4～0.268 0
大黄素 Y＝3 545 410.20X－89 201.43 0.999 6 0.045 9～0.917 6 0.114 6 0.176 0.180 0.359 101.67
2.2.6 精密度试验
精密吸取“2.2.2”项下混合对照品溶液 10 μL，按
“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。
结果显示，pleuropyrone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、
欧 鼠 李 苷 A、大 黄 素 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 1.10%、
1.13%、1.21%、0.28%（n＝6），表明仪器精密度较好。
2.2.7 稳定性试验
取紫九牛粉末（S10）0.2 g，精密称定，按“2.2.3”项下
方法制备供试品溶液，分别在室温放置0、2、4、8、12、24 h
时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果
显示，pleuropyrone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠
李苷 A、大黄素峰面积的 RSD 分别为 1.01%、1.30%、
1.29%、1.21%（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置24 h
内稳定性较好。
2.2.8 重复性试验
取紫九牛粉末（S10）0.2 g，精密称定，按“2.2.3”项下
方法平行制备 6 份供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件
进样测定，记录峰面积，并采用外标法（external standard
method，ESM）计算样品中 4 种成分的含量。结果显示，
pleuropyrone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷A、
大黄素的平均含量分别为2.476、1.536、1.203、4.163 mg/g，
RSD分别为1.06%、0.51%、1.02%、0.85%（n＝6），表明该
方法重复性较好。
2.2.9 加样回收率试验
取已知成分含量的紫九牛粉末（S10）6份，每份0.1 g，
精密称定，分别精密加入“2.2.2”项下各对照品储备液
2 mL，按“2.2.3”项下方法制备加样回收供试品溶液，按
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，计算 pleuropyrone A、大
黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷 A、大黄素的平均加
样回收率，结果见表 2。由表 2 可知，上述 4 种化学成分
的平均加样回收率为 99.41%～100.46%，RSD 均不大于
2.05%，表明该方法准确度较好。
中国药房 2024年第35卷第5期
表2 加样回收率试验结果（n＝6）
样品含 加入量/ 测得量/ 加样回 平均加样 RSD/
成分 取样量/g
量/mg mg mg 收率/% 回收率/% %
pleuropyrone A 0.115 4 0.286 0.281 0.564 98.93 99.41 1.64
0.114 2 0.283 0.281 0.566 100.71
0.123 0 0.305 0.281 0.578 97.15
0.110 8 0.274 0.281 0.551 98.58
0.118 2 0.292 0.281 0.578 101.78
0.114 6 0.284 0.281 0.563 99.29
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 0.115 4 0.177 0.180 0.353 97.78 100.46 1.62
0.114 2 0.175 0.180 0.356 100.56
0.118 2 0.182 0.180 0.364 101.11
欧鼠李苷A 0.115 4 0.139 0.134 0.276 102.24 99.50 2.05
0.114 2 0.137 0.134 0.270 99.25
0.123 0 0.148 0.134 0.279 97.76
0.110 8 0.133 0.134 0.269 101.49
0.118 2 0.142 0.134 0.272 97.01
0.114 6 0.138 0.134 0.271 99.25
大黄素 0.115 4 0.480 0.459 0.935 99.13 99.56 1.80
0.114 2 0.475 0.459 0.938 100.87
0.123 0 0.512 0.459 0.960 97.60
0.110 8 0.461 0.459 0.931 102.40
0.118 2 0.492 0.459 0.942 98.04
0.114 6 0.477 0.459 0.933 99.35
2.2.10 fi/s的测定及影响因素考察
（1）fi/s的测定。精密吸取“2.2.2”项下混合对照品溶
液，按“2.2.1”项下色谱条件分别进样1、2、5、10、15、20 μL，
记录pleuropyrone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李
苷 A、大黄素的峰面积，以大黄素为内参物计算 fi/s：fi/s＝
（As/Cs ）/（Ai/Ci ）；式中，As为内参物峰面积，Cs为内参物质
量浓度，Ai为待测成分峰面积，Ci为待测成分质量浓度。
平行测定3次，计算平均值。结果显示，pleuropyrone A、
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷A的fi/s平均值分别
为 1.147 2、0.874 7、0.644 4，RSD 分别为 2.15%、1.11%、
0.78%（n＝3）。
（2）不同仪器、色谱柱对 fi/s的影响。本研究分别考
察了不同仪器、不同色谱柱对 fi/s的影响，实验重复 3 次。
结果显示，分别采用 Waters e2695 型和 Agilent 1260 In‐
finity Ⅱ型 HPLC 仪，以 Agilent ZORBAX SB-C18、Waters
XBridge C18、ECHWAY GOWON C18为色谱柱进行检
TM
®
测时，pleuropyrone A的fi/s分别为1.151 3、1.126 1、1.134 4、
1.163 5、1.136 5、1.134 3，平均值为 1.141 0[RSD＝1.20%
（n＝6）]；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的fi/s分别为0.892 9、
0.868 5、0.875 6、0.893 4、0.871 3、0.870 5，平 均 值 为
0.878 7[RSD＝1.30%（n＝6）]；欧鼠李苷 A 的 fi/s 分别为
0.629 4、0.640 1、0.633 8、0.637 4、0.645 1、0.639 8，平均
值为 0.637 6[RSD＝0.86%（n＝6）]。上述结果表明，不
同品牌HPLC仪、不同色谱柱对fi/s的影响不大。
China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 5 · 563 ·