Page 58 - 《中国药房》2024年5期
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（3）不同流速对fi/s的影响。本研究考察了流速分别                        表3 紫九牛中4种化学成分的含量测定结果（n＝3）
          为 0.80、0.85、0.90、0.95、1.00、1.05 mL/min 时对 fi/s 的影       大黄素/   pleuropyrone A  大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷  欧鼠李苷A
          响，实验重复3次。结果显示，在上述不同流速下，pleu‐                        编号  （mg/g）  QAMS法/ ESM/  RSD/%  QAMS法/ ESM/  RSD/%  QAMS法/ ESM/  RSD/%
                                                                      （mg/g） （mg/g）  （mg/g） （mg/g）  （mg/g） （mg/g）
          ropyrone A的fi/s分别为1.146 5、1.148 5、1.149 0、1.146 7、  S1  0.483  0.846  0.836  1.10  0.158  0.152  2.74  0.185  0.189  1.51
          1.145  9、1.141  7，平 均 值 为 1.146  4[RSD＝0.23%（n＝     S2  0.974  0.679  0.666  1.37  0.366  0.358  1.56  0.167  0.162  2.15
                                                              S3  0.513  1.140  1.129  0.69  0.175  0.178  1.20  0.191  0.196  1.83
          3）]；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的 fi/s 分别为 0.880 0、
                                                              S4  0.612  0.790  0.803  1.15  0.175  0.172  1.22  0.141  0.139  1.01
          0.871  2、0.878  3、0.876  7、0.876  4、0.873  7，平 均 值 为  S5  1.434  1.161  1.173  0.73  0.483  0.473  1.48  0.417  0.412  0.85
          0.876 1[RSD＝0.36%（n＝6）]；欧鼠李苷 A 的 fi/s 分别为           S6  1.118  1.194  1.174  1.19  0.441  0.436  0.81  0.265  0.269  1.06
                                                              S7  3.445  1.425  1.410  0.75  0.414  0.421  1.19  0.648  0.642  0.66
          0.649 3、0.649 7、0.648 7、0.649 5、0.646 5、0.644 4，平均  S8  2.841  1.181  1.177  0.24  0.416  0.408  1.37  0.467  0.461  0.91
          值为 0.648 0[RSD＝0.33%（n＝6）]。上述结果表明，流                 S9  2.983  1.156  1.141  0.92  0.398  0.391  1.25  0.406  0.412  1.04
                                                              S10  4.163  2.453  2.476  0.66  1.531  1.536  0.23  1.212  1.203  0.53
          速对fi/s无显著影响。
             （4）不同柱温对fi/s的影响。本研究还考察了柱温分                       3 讨论
          别为 20、25、30、35 ℃时对 fi/s的影响，实验重复 3 次。结               3.1 供试品溶液制备方法与色谱条件的考察
          果显示。在不同柱温条件下，pleuropyrone A 的 fi/s分别                    本研究对供试品溶液的制备方法进行了单因素考
          为 1.137 3、1.124 0、1.127 0、1.122 0，平均值为 1.127 6      察，包括不同提取溶剂（甲醇、50%乙醇、95%乙醇、无水
          [RSD＝0.60%（n＝4）]；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的fi/s分             乙醇）、不同提取方式（超声提取、回流提取）、不同取样
                                                              量（0.2、0.5 g）、不同提取时间（20、40、60 min），最终确定
          别为 0.876 8、0.865 7、0.866 0、0.864 5，平均值为 0.868 3
                                                              了 0.2 g 紫九牛药材粉末用甲醇 25 mL 超声提取 40 min
          [RSD＝0.66%（n＝4）]；欧鼠李苷 A 的 fi/s分别为 0.636 9、
                                                              的供试品溶液制备方法。
          0.638 3、0.639 5、0.631 8，平均值为 0.636 6[RSD＝0.53%
                                                                  本研究考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1% 磷酸溶
         （n＝4）]。上述结果表明，柱温对fi/s无显著影响。
                                                              液、乙腈-0.1% 磷酸溶液等流动相系统，最终选择乙
          2.2.11 色谱峰的定位
                                                              腈-0.1% 磷酸溶液作为流动相进行梯度洗脱，此条件下
              精密吸取“2.2.2”项下混合对照品溶液，按“2.2.1”项
                                                              所得4种化学成分色谱峰的分离度均大于1.5、峰形较好
          下色谱条件进样检测，记录pleuropyrone A、大黄素-8-O-
                                                              且干扰峰少。通过 HPLC-光电二极管阵列检测器在
          β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷A、大黄素的保留时间，以大黄
                                                              210～400 nm波长范围内对4种化学成分进行全波长扫
          素为内参物计算各成分的相对保留值（R）：R＝tRi/tRs；式
                                                              描，结果显示，在269 nm波长处的吸收较好，且各种条件
          中，tRi为待测成分的保留时间，tRs为内参物大黄素的保留
                                                              均满足HPLC定量分析的要求，故选择269 nm作为最终
          时间。平行测定 3 次，取平均值。结果显示，分别采用
                                                              的检测波长。
          Waters e2695型和Agilent 1260 Infinity Ⅱ型HPLC仪，以
                                                              3.2 含量测定方法的考察
                                             ®
          Agilent ZORBAX SB-C18、Waters XBridge C18、ECHWAY
                                                                  为了保证紫九牛中 pleuropyrone A、大黄素-8-O-
          GOWON  C18为色谱柱进行检测时，pleuropyrone A的R
                  TM
                                                              β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷、大黄素 4 个定量指标的准确
          分别为0.197 7、0.192 4、0.178 3、0.198 0、0.194 0、0.177 1，  性，本研究首先对其线性关系及范围、精密度、重复性、
          平 均 值 为 0.189  6[RSD＝4.99%（n＝6）]；大 黄 素 -8-O-        稳定性、加样回收率等进行了方法学考察，在确定各指
          β -D- 葡 萄 糖 苷 的 R 分 别 为 0.339  7、0.351  6、0.319  3、  标符合要求的情况下，继续考察不同流速、柱温、色谱柱
          0.343 2、0.355 6、0.318 9，平均值为 0.338 1[RSD＝4.66%      以及不同仪器对各化学成分fi/s的影响。结果发现，不同
         （n＝6）]；欧鼠李苷A的R分别为0.673 5、0.700 1、0.656 4、            因素的改变对各化学成分fi/s的影响较小，表明该方法具
          0.682 6、0.709 2、0.661 5，平均值为 0.680 6[RSD＝3.08%      有较好的耐用性。同时，本研究对4种化学成分在紫九牛
         （n＝6）]。结果表明，不同品牌 HPLC 仪、不同色谱柱对                       药材中的存在性进行了定性分析，以确证 pleuropyrone
          R的影响较小，可对色谱峰准确定位。                                   A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷、大黄素存在于
          2.2.12 样品中大黄素等4种化学成分的含量测定                           紫九牛药材中，并分别考察了在不同品牌 HPLC 仪、色
              取10批紫九牛药材样品，采用ESM对pleuropyrone A、               谱柱条件下R的变化，结果显示R的变化较小；此外，本
          大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷 A、大黄素进行含                      研究还对 10 批紫九牛药材中上述 4 种化学成分的色谱
          量测定，并与 QAMS 法计算的结果进行比较，以验证                          峰进行了定位，结果显示定位效果较好。上述内容确保
          QAMS法用于紫九牛中4种成分含量测定的准确度及可                           了本研究中QAMS法的适用性和可行性。
          靠性。平行测定3次，取平均值。结果显示，2种方法所                               综上所述，本研究从瑶药紫九牛中提取分离得到了
          测结果无明显差异（RSD＜3.00%，n＝3），详见表3。                       大黄素、pleuropyrone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧


          · 564 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 5                               中国药房  2024年第35卷第5期
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