Page 56 - 《中国药房》2024年5期
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rone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷。                            2.2 紫九牛中4种化学成分的含量测定
              化合物11：黄色细针状结晶（乙酸乙酯重结晶）；可溶                       2.2.1 色谱条件
                                                                                    TM
          于 NaOH 稀溶液并呈红色或紫红色，加 HCl 稀溶液后颜                          采 用 Echway  Gowon   C18 色 谱 柱（250  mm×4.6
          色由红变黄，再次加 NaOH 稀溶液时颜色恢复红色；与                         mm，5 μm），以乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B）为流动相进
          大黄素对照品进行薄层色谱对照，发现比移值（Rf值）一                          行 梯 度 洗 脱（0～10  min，15%A→30%A；10～15  min，
          致，因此鉴定化合物11为大黄素（emodin）。                            30%A；15～20 min，30%A→35%A；20～35 min，35%A→
                                        1
              化 合 物 22：黄 色 粉 末 固 体 。 H-NMR（500  MHz，          45%A；35～40 min，45%A；40～50 min，45%A→80%A；
          pyridine-d5 ）：δ7.74（1H，s，H-7），7.66（1H，s，H-2），7.30   50～55 min，80%A→15%A；55～60 min，15%A）；流速为
         （1H，s，H-5），7.10（1H，s，H-4），6.30（1H，s，H-1′），4.75       1.0 mL/min；检测波长为 269 nm；进样量为 10 μL；柱温
         （1H，s，H-5′），4.66（1H，d，J＝7.4 Hz，H-2′），4.40（1H，t，      为25 ℃。
          J＝9.1 Hz，H-4′），4.28～4.19（1H，m，H-3′），2.24（3H，s，      2.2.2 混合对照品溶液的制备
                                              13
          H-15），1.62（3H，d，J＝5.8  Hz，H-6′）。 C-NMR（125              精密称取 pleuropyrone A、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖
          MHz，pyridine-d5 ）：δ191.33（C-9），181.86（C-10），165.58  苷、欧鼠李苷A、大黄素对照品各适量，加入甲醇制成质

         （C-1），164.30（C-8），163.03（C-6），149.19（C-3），136.00     量浓度分别为 140.40、90.20、67.00、229.40 μg/mL 的对
         （C-11），133.88（C-14），124.95（C-4），121.65（C-2），         照品储备液。分别精密量取各对照品储备液5 mL，置于
          114.35（C-13），111.57（C-12），110.35（C-7），109.90（C-     同一 25 mL 量瓶中，加甲醇制成含 pleuropyrone A、大黄
          5），100.41（C-1′），73.80（C-4′），72.65（C-2′），71.97（C-    素-8-O-β-D-葡萄糖苷、欧鼠李苷 A、大黄素分别为
          3′），71.83（C-5′），22.13（C-15），18.92（C-6′）。以上数据        28.08、18.04、13.40、45.88 μg/mL的混合对照品溶液。
          与文献[12]一致，因此鉴定化合物 22 为欧鼠李苷 A（fran‐                  2.2.3 供试品溶液的制备
          gulin A）。经 HPLC 峰面积归一化法测定其纯度不低于                         取紫九牛粉末（过60目筛）约0.2 g，精密称定，置具
          98%，可以用作对照品。                                        塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声
              化合物 33：灰褐色粉末固体。 H-NMR（500 MHz，                 （功率 100 W，频率 40 kHz）处理 40 min，放至室温，再次
                                         1
          Methyl sulfoxide-d6 ）：δ7.27（1H，s，H-6），6.80（1H，d，J＝  称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
          2 Hz，H-9），6.77（1H，d，J＝2 Hz，H-7），6.19（1H，s，H-3），     液，即得供试品溶液。
          5.06（1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），3.73（1H，brd，J＝10.8 Hz，
                                                              2.2.4 专属性考察
          H-6′b），3.55（1H，dd，J＝10.8、5.4 Hz，H-6′a），3.48（1H，         分别取上述混合对照品溶液、供试品溶液10 μL，按
          t，J＝8.2 Hz，H-2′），3.39（1H，m，H-5′），3.36（1H，m，H-      “2.2.1”项下色谱条件进样检测。结果显示，供试品溶液
          3′），3.27（1H，t，J＝9.4 Hz，H-4′），2.74（3H，s，5-CH3），      色谱图中，在与混合对照品溶液色谱图相同出峰位置有
                                13
          2.43（3H，s，2-CH3）。 C-NMR（125  MHz，methyl
                                                              色谱峰出现，且4种成分色谱峰的峰形对称，理论板数按
          sulfoxide-d6 ）：δ178.59（C-4），164.01（C-2），158.98（C-8），
                                                              各目标成分色谱峰计均不低于6 000，4种成分色谱峰与
          156.24（C-10），156.05（C-1b），138.15（C-6a），134.74（C-
                                                              相邻色谱峰的分离度均大于1.5。色谱图见图1。
          5），124.60（C-6），116.87（C-4a），111.80（C-3），107.86（C-
                                                                       0.20  1
          10a），102.77（C-7），102.38（C-9），100.65（C-1′），77.08              0.15
         （C-5′），76.99（C-3′），73.69（C-2′），69.42（C-4′），60.53             AU  0.10  2            4
                                                                       0.05           3
         （C-6′），22.95（5-CH3），19.15（2-CH3）。以上数据与文                        0
                                                                         0       6        12      18        24       30       36     42      48       54      60
          献[13]一致，因此鉴定化合物33为pleuropyrone A。                                           t/min
              化合物44：黄色粉末固体；可溶于NaOH稀溶液并呈                                           A.混合对照品溶液
                                                                       0.20  1
          红色或紫红色，加 HCl 稀溶液后颜色由红变黄，再次加                                  0.15
          NaOH稀溶液时颜色恢复红色；与大黄素-8-O-β-D-葡萄                              AU  0.10  2            4
                                                                       0.05           3
          糖苷对照品进行薄层色谱对照，发现二者 Rf值一致；与                                    0
                                                                         0       6        12      18        24       30       36     42      48       54      60
          该对照品进行 HPLC 对照，发现保留时间一致。因此，                                                 t/min
          鉴定化合物44为大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（emodin-8-O-                                     B.供试品溶液
                                                                 1：pleuropyrone A；2：大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷；3：欧鼠李苷A；
          β-D-glucoside）。经 HPLC 峰面积归一化法测定其纯度                  4：大黄素。
          不低于98%，可以用作对照品。                                     图1 混合对照品溶液和紫九牛供试品溶液的HPLC图


          · 562 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 5                               中国药房  2024年第35卷第5期
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