Page 62 - 《中国药房》2024年5期
P. 62

2 方法与结果                                             面积的 RSD 为 0.29%～3.00%（n＝7），表明该供试品溶
          2.1 色谱条件                                            液在室温放置24 h内稳定性良好。
              采用 Waters CORTECS UPLC T3 色谱柱（2.1 mm×           2.3.3 重复性试验
          150 mm，1.6 µm），以乙腈（A）-0.3% 磷酸溶液（B）为流                    取钩藤药材（编号S9），按“2.2.3”项下方法制备供试
          动相进行梯度洗脱（0～1 min，4%A→7%A；1～7 min，                   品溶液，平行制备6份，按“2.1”项下色谱条件进样测定，
          7%A→9%A；7～11  min，9%A→13%A；11～19  min，              以钩藤碱为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相
          13%A；19～23 min，13%A→18%A；23～28 min，18%A；            对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD为
          28～32 min，18%A→25%A；32～37 min，25%A→30%A；            0.01%～0.11%（n＝6），相对峰面积的 RSD 为 0.40%～
          37～40 min，30%A→100%A；40～45 min，100%A）；柱温            3.00%（n＝6），表明该方法重复性良好。
          为 40 ℃；流速为 0.3 mL/min；进样量为 1 μL；检测波长                2.4 不同产地钩藤药材特征图谱的建立
          为245 nm。                                                取43批不同产地的钩藤药材样品（编号S1～S43），
          2.2 溶液的制备                                           按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条
          2.2.1 混合对照品溶液                                       件进样测定，记录色谱图。采用《中药指纹图谱相似度
              取儿茶素、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、去氢钩藤                        评价系统（2012 版）》进行分析，以样品 S1 的图谱为参
          碱、异钩藤碱、异去氢钩藤碱、异绿原酸C、钩藤碱、喜果                          照，对 43 批钩藤药材色谱图进行多点校正和 Mark 峰匹
          苷适量，精密称定，加甲醇定容成每1 mL含儿茶素5 μg、                       配，然后生成叠加特征图谱（图1）。结果显示，43批钩藤
          绿原酸 30 μg、隐绿原酸 30 μg、异绿原酸 B 50 μg、去氢                药材色谱图中共发现13个共有峰，进一步通过与对照药
          钩藤碱5 μg、异钩藤碱30 μg、异去氢钩藤碱50 μg、异绿                    材溶液和混合对照品溶液的图谱（图 2）进行对比，确认
          原酸C 40 μg、钩藤碱40 μg、喜果苷60 μg的混合对照品                   峰2为儿茶素、峰3为绿原酸、峰4为隐绿原酸、峰7为异
          溶液。                                                 绿原酸 B、峰 8 为异去氢钩藤碱、峰 9 为异钩藤碱、峰 10
          2.2.2 对照药材溶液                                        为去氢钩藤碱、峰 11 为异绿原酸 C、峰 12 为钩藤碱、峰
              取钩藤对照药材 0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶                      13为喜果苷。
          中，精密加入 70% 甲醇 20 mL，称定重量，超声处理（功                      1 200        3                 9 10      13
          率 250 W，频率 40 kHz，下同）20 min；放冷，用 70% 甲醇              1 100     1  2  4       5  6  7 8  11 12（S）
                                                               1 000
          补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得对照药材                             900
                                                                800
          溶液。                                                   700
          2.2.3 供试品溶液                                          U/mV  600
                                                                500
              取钩藤药材粉末约 0.5 g，精密称定，置于具塞锥形                        400
          瓶中，精密加入 70% 甲醇 20 mL，称定重量，超声处理                        300
                                                                200
          20 min，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，                        100
                                                                 0
          取续滤液，即得供试品溶液。
                                                                   0         2          4    6    8   10  12  14  16  18   20  22  24  26   28  30  32  34  36  38  40  42  44
          2.3 方法学考察                                                                   t/min
                                                               图1 43批不同产地钩藤药材的UPLC叠加特征图谱
          2.3.1 精密度试验
              取钩藤药材（编号 S9）按“2.2.3”项下方法制备供试                    2.5 不同产地钩藤药材的化学模式识别分析
          品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样 6 次，以钩藤碱                           本研究发现，43 批钩藤药材特征图谱的其余 12 个
          为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面                             特征峰（以钩藤碱为参照峰）相对峰面积的 RSD 为
          积 。 结 果 显 示 ，各 共 有 峰 相 对 保 留 时 间 的 RSD 为            76.79%～253.32%（n＝43），表明不同产地钩藤药材质量
          0.01%～0.08%（n＝6），相对峰面积的 RSD 为 0.22%～                存在差异。因此，笔者采用化学计量学方法CA、PCA对
          2.90%（n＝6），表明仪器精密度良好。                               其进行质量评价，以期为钩藤药材质量控制提供参考。
          2.3.2 稳定性试验                                         2.5.1 CA
              取钩藤药材（编号 S9）按“2.2.3”项下方法制备供试                        以 13 个共有峰的峰面积为变量，将其导入 SPSS
          品溶液，于室温放置 0、4、8、12、16、20、24 h 时按“2.1”项              24.0 软件，采用瓦尔德法，选用欧氏距离进行 CA，结果
          下色谱条件进样测定，以钩藤碱为参照峰，计算各共有                            见图3。
          峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰                                结果显示，当欧氏距离为24.5时，样品分为两大类，
          相对保留时间的 RSD 为 0.01%～0.08%（n＝7），相对峰                  其中湖南与江西产地的样品聚为一类；贵州、广西、四


          · 568 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 5                               中国药房  2024年第35卷第5期
   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67