Page 66 - 《中国药房》2024年4期

病之间的关系），突出关键靶点及相关蛋白。将共同靶 2.2.7 大鼠关键通路和凋亡相关蛋白表达检测
点 导 入 Metascape 分 析 平 台（https：//www. metascape. 采用 Western blot 法进行检测。取大鼠洗净的心肌
org），对共同靶点进行基因本体（gene onto-logy，GO）和 组织，裂解，匀浆，以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清
京都基因和基因组数据库（Kyoto encyclope-dia of genes 液，测定蛋白浓度，煮沸变性。取变性后的蛋白样品放
and genomes，KEGG）信号通路富集分析。 入凝胶板，电泳，转膜，封闭，加入PI3K、Akt、Bcl-2、Bax、
2.2 动物实验研究 caspase-3、GAPDH 一抗稀释液（稀释比例为 1∶1 000、
2.2.1 分组与给药 1∶1 000、1∶5 000、1∶5 000、1∶500、1∶1 000），4 ℃下孵育
将72只SD大鼠随机分为模型组、假手术组、丹参组 过夜；加入二抗稀释液（稀释比例为1∶3 000），室温下孵
（阳性对照组）和匝迪-5 味丸高、中、低剂量组，每组 12
育 30 min；暗室曝光、显影，将胶片进行扫描存档，用
只。模型组和假手术组大鼠灌胃等体积蒸馏水，丹参组 PhotoShop 软件整理去色，采用 AlphaEase FC 软件测定
大鼠给予复方丹参滴丸80 mg/（kg·d）灌胃，匝迪-5味丸
灰度值。以目标蛋白与内参蛋白（GAPDH）的灰度值比
高、中、低剂量组大鼠分别给予匝迪-5味丸药粉1.6、0.8、
值表示目标蛋白的表达水平。
0.4 g/（kg·d）灌胃，给药剂量按前期预实验结果设置。各
2.2.8 统计学方法
组大鼠均按10 mL/kg灌胃，每天1次，连续14 d。
采用SPSS 25.00软件对数据进行统计分析，数据均
2.2.2 模型建立
以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两
末次灌胃后2 h，将各组大鼠麻醉后取仰卧位固定，
两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
监测记录心电图；剖开左侧L3～L4肋间，暴露心脏，结扎
3 结果
左冠状动脉前降支，使其缺血30 min，再灌注2 h（其中假
3.1 网络药理学分析结果
手术组只穿线不结扎），建模同时记录其心电图。当大
3.1.1 匝迪-5味丸的活性成分与心肌缺血的共同靶点
鼠心肌或心尖苍白或发绀，心电图示 ST 段升高 0.1 mV
共检索获得177个匝迪-5味丸的活性成分及220个
或 QRS 波提高增粗，则提示缺血建模成功；当大鼠心肌
作用靶点，501 个心肌缺血相关靶基因。将匝迪-5 味丸
缺血部位充血变红或 ST 段缓慢下降约 50%，则提示再
灌注建模成功 。 的活性成分作用靶点与心肌缺血相关靶基因进行交叉，
[7]
2.2.3 采样 共获得 51 个共同靶点。所构建的 PPI 网络（图 1）中，有
大鼠建模完成后，开腹，于腹主动脉采血，待血凝 51 个节点和 718 条边，匝迪-5 味丸改善 MIRI 主要以
后，于4 ℃下以3 500 r/min离心15 min，取上清液保存待 AKT1 为 核 心 靶 点 ，协 同 IL6、PTGS2、EGFR、IL1B、
测。采血结束后，摘取各组大鼠结扎部位以下的心肌组 PPARA、PPARG、STAT3、MTOR 等 多 个 靶 点 共 同 发 挥
织，每组取6只大鼠的心肌组织用磷酸盐缓冲液洗净后 作用。
待测，另6只大鼠的心肌组织用福尔马林固定待测。
2.2.4 大鼠心肌酶含量检测
取各组大鼠血清，按照 ELISA 试剂盒说明书操作，
检测血清中CK、LDH、AST、CTn-T的含量。
2.2.5 大鼠心肌组织形态观察
将福尔马林固定的心肌组织梯度脱水，常规石蜡包
埋，切片（3.5 μm），用二甲苯脱蜡后进行苏木精-伊红
（hematoxylin-eosin，HE）染 色 ，中 性 树 胶 封 片 。 应 用
Image-Pro Plus 6.0 软件采集图像，观察大鼠心肌组织的
形态变化。
2.2.6 大鼠心肌细胞凋亡检测
取“2.2.5”项下的心肌组织切片，按照 TUNEL 检测
方法进行染色，使用光学显微镜观察，正常心肌细胞核
呈蓝色，凋亡阳性心肌细胞核呈棕黄色。每张阳性切片
选取6个阳性细胞最多的视野，计算阳性细胞百分比，即
细胞凋亡指数（cell apoptotic index，CAI）。 图1 匝迪-5味丸改善MIRI的PPI网络图

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