Page 36 - 《中国药房》2024年4期
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雷公藤别名黄藤、断肠草，为卫矛科植物雷公藤                           1.3 实验动物与细胞
          Tripterygium wilfordii Hook. f. 的根、叶及花，始载于《神            雄性 KM 小鼠 30 只，体重（23±2）g，由斯贝福（北
          农本草经》，具有祛风除湿、通络止痛、解毒杀虫的功                            京）生物技术有限公司提供，生产许可证号为SCXK（京）
            [1]
          效 。现代临床研究表明，雷公藤可用于治疗类风湿性                            2019-0010；所有动物实验遵循江西中医药大学动物实
          关节炎、紫癜性肾炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾                            验伦理委员会有关实验动物管理和使用的规定，符合3R
          病，疗效显著      [2―4] 。雷公藤甲素是雷公藤的主要活性成                  原则。人永生化角质形成细胞（HaCat）购自中国科学院
          分和毒性成分，其活性强、毒性大、生物利用度低、难溶                           典型培养物保藏委员会细胞库，目录号为SCSP-5091。
          于水、药物吸收性差，长期服用不仅会刺激胃肠道，引起                           2 方法与结果
          中枢神经损伤，还会造成严重的肝肾毒性                  [5―6] ，因此雷公     2.1 川芎挥发油主要成分的鉴定
          藤甲素是目前所有雷公藤制剂质量控制和安全标准的                                 采用 GC-MS 法。参照文献[11―12]中川芎挥发油
                        [7]
          主要指标性成分 。有研究显示，雷公藤制剂经皮给药                            的 GC-MS 鉴定方法，精密量取川芎挥发油 50 μL，置于
          可以在发挥药效的同时很好地降低雷公藤甲素的毒                              10 mL容量瓶中，用正己烷定容，充分混匀后过0.22 μm
            [1]
          性 。配伍减毒增效是中医药特色之一，通过配伍可促                            微孔滤膜，待测。GC-MS条件如下：Agilent HP-5 MS色
          进毒性药物代谢、拮抗毒性药物的峻烈之性并协同发挥                            谱柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；程序升温（60 ℃保持3
          疗效，起到增效减毒的作用。本课题组前期通过数据挖                            min；以 4 ℃/min 升至 120 ℃，保持 5 min；以 6 ℃/min 升
          掘雷公藤外用治疗类风湿性关节炎的用药规律发现，雷                            至 210 ℃，保持 5 min；以 8 ℃/min 升至 280 ℃，保持 5
          公藤外用时常与乳香、没药、川芎等配伍发挥增效减毒                            min）；载气为高纯氮气；流速为1 mL/min；分流比为20∶1；
              [8]
          作用 。川芎挥发油是川芎的主要成分之一，由苯酞类、                           进样口温度为200 ℃；火焰离子化检测器温度为250 ℃；
          烯萜醇类、脂肪酸类等成分组成，具有较好的抗炎、抗氧                           进样量为1 μL。质谱条件如下：离子源为电子轰击离子
                                         [9]
          化、调节细胞凋亡与细胞自噬等作用 ，同时其还可以作                           源；电子能量为 70 eV；接口温度为 280 ℃；离子源温度
          为一种透皮促渗剂来促进药物的透皮吸收 。基于此，                            为230 ℃；质量扫描范围为29～550 mAU。
                                               [10]
                                                                  结果，本研究共鉴定出川芎挥发油中的62个化学成
          本研究探讨了川芎挥发油对雷公藤甲素体外透皮性能
                                                              分 ，通 过 美 国 国 家 标 准 与 技 术 研 究 所 数 据 库 20. L
          和细胞毒性的影响，以期为后续川芎挥发油配伍雷公藤
                                                             （https：//www.sisweb.com/software/ms/nist.htm）匹配化合
          甲素的体内实验和配伍减毒作用机制研究，以及相关外
                                                              物，并采用峰面积归一化法计算各化合物的相对百分含
          用制剂的开发奠定基础。
                                                              量。川芎挥发油中相对百分含量排前 10 位的化学成分
          1 材料
                                                              及其相关信息见表1。
          1.1 主要仪器
                                                              表1 川芎挥发油中相对百分含量排前 10 位的化学成
              本研究所用主要仪器包括1260型高效液相色谱仪、
                                                                   分及其相关信息
          6890N-5973N 型 气 相 色 谱 - 质 谱（gas  chromatography-
                                                              化学成分              保留时间/min          相对百分含量/%
          mass spectrometry，GC-MS）联用仪（美国 Agilent 公司），         Z-藁本内酯             33.567 7           41.219
          XD-202 型倒置显微镜（南京江南永新光学有限公司），                        洋川芎内酯              33.214 6           14.280
          Incubator 型 CO2培养箱（上海力申科学仪器有限公司），                   β-瑟林烯              26.644 3            6.465
                                                              γ-松油烯              9.876 5             4.626
          TECAN Spark型多功能酶标仪（西安昊兴生物科技有限                       Z-亚丁基苯酞            32.062 1            4.200
          公司），TT-6D Franz 型扩散池（天津正通科技有限公                      萜品油烯               10.908 3            3.872
                                                              丁苯酞                31.566 1            2.418
          司）等。
                                                              （1S）-（－）-α-蒎烯      5.924 2             2.392
          1.2 主要药品与试剂                                         E-藁本内酯             38.199 6            2.009
              川芎挥发油（批号 20220711）购自颇黎芳香医药科                     邻-异丙基苯             8.703 5             1.830
          技（上海）有限公司；雷公藤甲素对照品（批号20150813，                      2.2 雷公藤甲素透皮接收液的含量测定方法
          纯度≥98%）购自成都普菲德生物技术有限公司；单硬                               含量测定采用高效液相色谱法。
          脂酸甘油酯（批号0210220）购自福晨（天津）化学试剂有                       2.2.1 对照品、供试品溶液的制备
          限公司；轻质液体石蜡购自西安天正药用辅料有限公                                 取雷公藤甲素对照品适量，精密称定，置于棕色瓶
          司；羊毛脂（批号 1902172）、三乙醇胺（批号 21090101）、                中，加甲醇溶解并定容，制成每1 mL含雷公藤甲素0.25 mg
          无水乙醇（批号161217）均购自西陇科学股份有限公司；                        的溶液，过0.22 μm微孔滤膜，即得对照品溶液。
          硬脂酸（批号RH252437）购自上海易恩化学技术有限公                            按“2.3.1”项下方法制备乳膏，再按“2.4”项下方法进
          司；DMEM 高糖培养基（批号 20220726）购自北京索莱                     行体外透皮实验，取各组 Franz 扩散池中的透皮接收液
          宝生物科技有限公司。                                          1 mL，过0.22 μm微孔滤膜，即得供试品溶液。


          · 414 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 4                               中国药房  2024年第35卷第4期
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