Page 33 - 《中国药房》2024年4期
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[14]
          3.5 “易层”贴敷对大鼠滑膜组织中 HMGB1/TLR4/                     诱发纤维化的潜在因素之一 。可见，滑膜炎症的严重
          NF-κB信号通路相关蛋白及mRNA表达的影响                            程度可反映SF的进展情况。本研究通过ELISA法检测
              与 假 手 术 组 比 较 ，KOA 组 大 鼠 滑 膜 组 织 中             了大鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量，结果
          HMGB1、TLR4 蛋白及 mRNA，p-NF-κB p65 蛋白及 NF-            显示，KOA大鼠血清中上述炎症因子的含量均较假手术
          κB p65 mRNA的表达均显著上调（P＜0.01）；与KOA组                  组大幅增加，而易层组大鼠的上述指标含量则显著降
          比较，易层组大鼠滑膜组织中上述指标的表达均显著下                           低。HE染色结果显示，相较于假手术组，KOA组大鼠滑
          调（P＜0.05 或 P＜0.01）。而各组大鼠滑膜组织中 NF-                  膜衬里细胞（以成纤维样滑膜细胞为主）增生明显且排
          κB p65 蛋白的表达比较，差异均无统计学意义（P＞                        列紊乱，炎症细胞浸润增加，Krenn 评分显著升高；而易
          0.05）。结果见图4、表5。                                    层组大鼠滑膜病变明显改善，且Krenn评分显著降低，表
                                                             明“易层”贴敷可显著改善KOA大鼠的滑膜炎症。
                HMGB1                             25 kDa
                                                                 纤维化的形成与胶原蛋白表型的转换密切相关，纤
                                                             维状胶原蛋白collagenⅠ的表达与纤维化的严重程度呈
               NF-κB p65                          65 kDa                                   [15]
                                                             正相关，是经典的纤维化标志物 。TGF-β、TIMP1、
                                                             α-SMA 均为纤维化相关因子，参与调节 ECM 的组成和
              p-NF-κB p65                         65 kDa
                                                                                  [16]
                                                             介导多种纤维化的发生 。本研究检测了各组大鼠滑
                                                             膜组织中纤维化相关蛋白及mRNA的表达情况，结果显
                 TLR4                             25 kDa
                                                             示，KOA组大鼠滑膜组织中纤维化相关指标TGF-β、col‐
                                                             lagenⅠ、TIMP1、α-SMA 蛋白及 mRNA 的表达均显著上
                GAPDH                             37 kDa
                                                             调，而易层组大鼠上述蛋白及 mRNA 的表达均显著下
                       假手术组      KOA组     易层组
         图4 各组大鼠滑膜组织中HMGB1/TLR4/NF-κB信号                      调。Masson染色结果显示，相较于假手术组，KOA组大
               通路相关蛋白表达的电泳图                                  鼠的滑膜组织存在大量的胶原纤维增生；而经“易层”贴
                                                             敷干预后，大鼠的 SF 程度明显减轻。免疫组化结果显
         表5 各组大鼠滑膜组织中HMGB1/TLR4/NF-κB信号
                                                             示，KOA 组大鼠滑膜组织中 collagenⅠ沉积较假手术组
               通路相关蛋白及mRNA表达比较（x±s，n＝5）
                                                             显著增多，而易层组大鼠上述指标得以逆转。这提示，
                          蛋白                   mRNA
          组别                                                “易层”贴敷很可能通过抑制各种炎症因子的表达而抑
                HMGB1  TLR4  NF-κB p65 p-NF-κB p65 HMGB1  TLR4  NF-κB p65
          假手术组 0.11±0.01  0.40±0.03  0.39±0.02 0.55±0.07  1  1  1  制纤维化的发生，从而改善KOA。
          KOA组  0.68±0.11 a  1.42±0.24 a  0.38±0.19 1.56±0.05 2.20±0.37 4.81±0.97 3.06±0.20 a  HMGB1 是一种参与炎症反应的多功能蛋白，在组
                                                  a
                                             a
                                       a
          易层组   0.21±0.04 b  0.68±0.10 b  0.37±0.03 0.75±0.10 1.56±0.33 1.70±0.31 1.86±0.95 b
                                                  b
                                       b
                                             c
                                                             织修复和纤维化中具有关键作用，可参与各种器官纤维
             a：与假手术组比较，P＜0.01；b：与KOA组比较，P＜0.01；c：与
                                                                          [17]
         KOA组比较，P＜0.05。                                      化疾病的发生 。通常情况下，HMGB1 存在于细胞核
          4 讨论                                               中；在感染或损伤期间，HMGB1 会发生迁移，逐渐从细
                                                                                            [18]
              KOA 晚期患者膝关节滑膜通常会发生以 ECM 沉                      胞核转移至细胞质，再移动到细胞外 。HMGB1/TLR4/
          积、纤维结缔组织聚集等为主要特征的纤维化病变，从                           NF-κB 信号转导与炎症的发生及 ECM 的合成密切相
                              [9]
          而引发炎症和组织损伤 ，这也是导致患者膝关节疼痛、                          关：释放到细胞膜外的 HMGB1 与靶细胞的 TLR4 结合
          僵硬和功能障碍的首要原因。中医把纤维化病机归为                            后，可激活下游 NF-κB 信号通路，进而诱发炎症级联反
          风、寒、湿、邪侵袭所导致的经脉瘀阻、筋骨屈伸不利 。                         应并诱发纤维化，因此抑制 HMGB1 可显著减少组织
                                                      [10]
                                                                                   [19]
          现代中医理论认为，温经活血类中药可针对其虚、寒、瘀                          炎症反应并改善纤维化 。本研究免疫组化结果显
          的病机特点，经多靶点、多途径发挥对纤维化病变的干                           示，经“易层”贴敷干预后，大鼠滑膜组织中 HMGB1/
          预作用，在各种纤维化疾病的治疗领域中表现出一定的                           TLR4/NF- κB 信 号 通 路 相 关 蛋 白（HMGB1、p-NF- κB
              [11]
          优势 。“易层”贴敷作为一种新型的中医外治疗法，其                          p65）的表达均较 KOA 组显著下调；此外，Western blot、
          方中含有当归、丹参、川牛膝等温经活血类中药，同时具                          real-time PCR 实验结果也显示，易层组大鼠滑膜组织
          有安全性高、副作用少等优点，在KOA的临床治疗方面                          中 HMGB1、TLR4 蛋白及 mRNA，p-NF-κB p65 蛋白及
          取得了良好的效果        [4，12] 。                           NF-κB p65 mRNA 的表达均较 KOA 组显著下调，提示
              研究指出，SF的发生与滑膜炎症密切相关，KOA患                      “易层”贴敷改善 KOA 大鼠 SF 的作用可能与其抑制
          者大多伴有滑膜炎症，膝关节内的炎症环境较为复杂，                           HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的激活有关。
          且长期的慢性炎症可能会导致上皮间充质转化的发生，                               综上所述，“易层”贴敷可改善KOA模型大鼠的SF，
                                                    [13]
          这种转化也是各种纤维化疾病的常见诱因之一 ；此                            降低炎症及纤维化相关指标的含量/表达，抑制HMGB1/
          外，纤维化是机体内一种过度的修复反应，炎症环境是                           TLR4/NF-κB信号通路可能与这一作用的发挥有关。然


          中国药房  2024年第35卷第4期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 4    · 411 ·
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