Page 37 - 《中国药房》2024年4期
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2.2.2 色谱条件                                            35
                                                                30
              采用 Symmetry C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱            25
          柱，流动相为乙腈-水（42∶58，V/V），流速为 0.8 mL/min，                mAU  20
                                                                15
          检测波长为218 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。                        10
                                                                5
          2.2.3 方法学考察                                           0
                                                                   0.5  1.0  1.5  2.0  2.5  3.0  3.5  4.0  4.5  5.0  5.5  6.0  6.5  7.0  7.5  8.0  8.5  9.0  9.5 10.0
             （1）专属性考察：取“2.2.1”项下对照品、供试品溶液                                             t/min
          及 20% 乙醇生理盐水（空白透皮接收液）各适量，按                                             A.空白透皮接收液
                                                                40
         “2.2.2”项下色谱条件进样测定。结果显示，相同时间下                           35                                  雷公藤甲素
                                                                30
          对照品与供试品溶液存在相同色谱峰，空白透皮接收液                             mAU 25
                                                                20
          不干扰雷公藤甲素的检测（图 1）。（2）线性关系考察：取                          15
                                                                10
         “2.2.1”项下对照品溶液，以甲醇稀释，配制质量浓度为                           5
                                                                0
          30.75、20.5、12.3、6.15、0.82、0.615 μg/mL 的雷公藤甲素             0.5  1.0  1.5  2.0  2.5  3.0  3.5  4.0  4.5  5.0  5.5  6.0  6.5  7.0  7.5  8.0  8.5  9.0  9.5 10.0
                                                                                      t/min
          对照品系列溶液，按“2.2.2”项下色谱条件进样测定，记                                             B.对照品溶液
          录峰面积。以雷公藤甲素峰面积为纵坐标（A）、质量浓                             45
                                                                40
          度 为 横 坐 标（C）进 行 回 归 分 析 ，得 回 归 方 程 为 A＝               35
                          2
          26.615C+13.300，R ＝0.999 8（n＝6）。结果表明，雷公藤              mAU 30
                                                                25
                                                                20
          甲素质量浓度在 0.615～30.75 μg/mL 线性范围内与峰                     15
                                                                10
          面积呈良好线性关系。（3）精密度考察：取“2.2.1”项下对                        5 0                                  雷公藤甲素
          照品溶液，按“2.2.2”项下色谱条件连续进样6次，记录峰                            0.5  1.0  1.5  2.0  2.5  3.0  3.5  4.0  4.5  5.0  5.5  6.0  6.5  7.0  7.5  8.0  8.5  9.0  9.5 10.0
                                                                                      t/min
          面积。结果显示，雷公藤甲素峰面积的 RSD 为 0.51%                                            C.供试品溶液
                                                                     图1 专属性考察的高效液相色谱图
         （n＝6），表明仪器精密度良好。（4）重复性考察：取雷公
          藤甲素组扩散 24 h 后的透皮接收液 6 份，按“2.2.1”项下                 乳膏和雷公藤甲素乳膏及配伍乳膏各1 g，置于EP管中，
          方法制备供试品溶液，再按“2.2.2”项下色谱条件进样检                       分别在45、4、－20 ℃的条件下放置24 h，结果显示，上述
          测，记录峰面积。结果显示，雷公藤甲素峰面积的 RSD                         寒热条件均不会对乳膏产生影响。（3）含药量：称取雷公
          为 0.73%（n＝6），表明该方法重复性良好。（5）稳定性考                    藤甲素乳膏和配伍 1∶10、配伍 1∶50、配伍 1∶100 乳膏各
          察：取雷公藤甲素组扩散 24 h 后的透皮接收液，分别于                       1 g，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容后涡旋、超声使溶
          放置 0、2、4、6、8、10、12、24 h 时按“2.2.2”项下色谱条件            解，过 0.22 μm 微孔滤膜后按“2.2.2”项下色谱条件进行
          进样测定，记录峰面积。结果显示，峰面积的 RSD 值为                        含量测定，每份样品平行制样 3 份。结果显示，雷公藤
          1.08%（n＝8），表明该样品在 24 h 内稳定。（6）加样回收                 甲素乳膏和配伍 1∶10、配伍 1∶50、配伍 1∶100乳膏中雷
          率试验：取雷公藤甲素组扩散 24 h 后的透皮接收液，测                       公藤甲素的含药量分别为（211.0±9.2）、（209.8±7.8）、
          定其质量浓度，然后分别加入0.8、1、1.2倍该质量浓度的                     （213.6±6.8）、（217.5±10.3）μg/g（n＝3）。
          雷公藤甲素对照品，按“2.2.2”项下色谱条件进样测定，                       2.4 川芎挥发油对雷公藤甲素体外透皮性能的影响
          计算其加样回收率。结果显示，雷公藤甲素的平均加样                           2.4.1 小鼠离体皮肤的制备
          回收率为 102.3%，RSD 为 4.05%（n＝3），表明该方法准                    取雄性 KM 小鼠 30 只，适应性喂养 3 d，腹腔注射
          确度良好。                                              50 mg/kg 戊巴比妥钠溶液麻醉，脱毛后取下腹皮，用生
          2.3 乳膏的制备及质量评价                                     理盐水和棉球去除皮肤上多余的脂肪和淋巴组织，用螺
          2.3.1 乳膏的制备                                        旋测微仪测量皮肤厚度后迅速放入－20 ℃冰箱中保存
              根据本课题组前期研究结果             [13―14] 及制备乳膏的经       备用。
          验，并结合预实验结果，分别制备空白乳膏、雷公藤甲素                          2.4.2 乳膏体外透皮实验
          乳膏、雷公藤甲素配伍川芎挥发油质量比为1∶10、1∶50、                          从－20 ℃冰箱中取出小鼠离体皮肤，置于 37 ℃生
          1∶100（以下分别简称“配伍 1∶10”“配伍 1∶50”“配伍                  理盐水中解冻 10 min，冲洗干净后用滤纸吸干水分，将
          1∶100”）的乳膏。                                        小鼠皮肤固定于 Franz 扩散池中的供给池和接收池之
          2.3.2 乳膏质量评价                                       间，再向接收池中注入 20% 乙醇生理盐水作为接收液，
             （1）离心稳定性：称取空白乳膏和雷公藤甲素乳膏                         排尽气泡后用封口膜密封，调节扩散池温度为（37.0±
          及配伍乳膏各1 g，以3 500 r/min离心30 min，结果显示，               0.2）℃，以 350 r/min 平衡 30 min。将小鼠皮肤分为雷公
          该条件下空白乳膏和雷公藤甲素乳膏及配伍乳膏均未                            藤甲素组和配伍1∶10、配伍1∶50、配伍1∶100组，分别取
          见分层破乳现象。（2）耐寒、耐热性评价：分别称取空白                         雷公藤甲素乳膏和配伍 1∶10、配伍 1∶50、配伍 1∶100 乳


          中国药房  2024年第35卷第4期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 4    · 415 ·
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