Page 30 - 《中国药房》2024年4期
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were  all  increased  significantly  in  synovial  tissues  of  rats （P＜0.01）.  Compared  with  the  KOA  group，  the  pathological  changes  in
          the  synovial  tissue  of  rats  in  Layers  adjusting  external  application  group  were  significantly  improved，  and  the  above  quantitative
          indicators  were  significantly  reversed （P＜0.05  or  P＜0.01）.  CONCLUSIONS  “Layers  adjusting  external  application”  paste  could
          significantly improve SF in KOA rats， the mechanism of which may be associated with the inhibition of the activation of HMGB1/
          TLR4/NF-κB signaling pathway.
          KEYWORDS     knee  osteoarthritis；  synovial  inflammation；  synovial  fibrosis；  high  mobility  group  protein  B1/Toll-like  receptor  4/
          nuclear factor-κB signaling pathway


              膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）是常见的慢             1.2 主要药品与试剂
          性退行性疾病，好发于中老年人群，且致残率较高。随                               “易层”贴敷由三色散（由当归、独活、川芎、秦艽、紫
          着人口老龄化的加剧，全球症状性 KOA 的患病率已达                          荆皮、马钱子、丹参、赤芍、天花粉、防风、连翘、片姜黄、
          3.8%，成为亟待解决的公共卫生问题之一 。KOA是一                         羌活、蔓荆子、白芷、木瓜、川牛膝、威灵仙、防己、甘草等
                                              [1]
          种全关节疾病，其发病与关节软骨及软骨周围组织的病                            组方而成，苏药制字 Z04000566，每贴 20 g，相当于生药
          理变化（如关节软骨破坏、软骨下骨改变和骨赘形成等）                           总量 16 g）和复方三黄油膏（由黄芩、黄柏、大黄、东丹、
              [2]
          有关 。研究表明，滑膜病变在KOA的发病过程中具有                           滑石粉等组方而成，苏药制字 Z04000388，每贴 10 g，相
          重要作用。滑膜炎症可能是 KOA 的始动环节，在滑膜                          当于生药总量8 g）组成，两者均由南京中医药大学附属
          炎症的晚期通常伴随着滑膜纤维化（synovial fibrosis，                  医院/江苏省中医院提供。
          SF）的发生，后者以胶原异常重塑、纤维结缔组织聚集和                              兔源转化生长因子 β（transforming growth factor-β，
          细胞外基质（extracellular matrix，ECM）沉积为主要表               TGF-β）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，
                                                      [3]
          现，被认为是患者膝关节僵硬、功能障碍的重要原因 。
                                                              α-SMA）抗体（货号分别为 3711S、19245S）均购自美国
             “易层”贴敷是由全国名老中医诸方受教授在传统
                                                              CST 公 司 ；兔 源 甘 油 醛 -3- 磷 酸 脱 氢 酶（GAPDH）、
          中医贴敷疗法的基础上，结合多年临床经验研制出的新
                                                              HMGB1、TLR4、NF-κB p65、磷酸化 NF-κB p65（phos‐
          型中医外治方法。该贴敷共有两层，第1层复方三黄油
                                                              phorylated NF-κB p65，p-NF-κB p65）、金属蛋白酶组织
          膏含黄柏、黄芩、大黄3味凉性中药，可直接敷于患者皮
                                                              抑制物1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1）、
          肤；第2层三色散则由当归、川牛膝等温经活血类中药组
                                                              Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）抗体（货号分别为 AF7021、
          成，性温燥，具有活血、通络、止痛之功；两层中药相辅相
                                                              AF7020、AF7017、AF5006、AF2006、AF7007、AF7001）均
          成，且可根据患者寒热证型灵活调整用量，改善KOA患
          者的膝关节疼痛和活动受限等症状的疗效较好                     [4―5] 。本   购自美国 Affinity 公司；辣根过氧化物酶标记的亲和纯
                                                              化山羊抗兔 IgG（H+L）二抗（货号 K1223）购自美国
          课题组前期研究发现，“易层”贴敷不仅能够缓解 KOA
                                                              APExBIO公司；5×蛋白上样缓冲液（货号P0015L）购自
          模型大鼠的滑膜炎症和关节疼痛，还具有抑制 SF 的作
                                                              上海碧云天生物技术有限公司；RNA 快速提取试剂盒
          用，上述作用可能与该贴敷能够抑制高迁移率族蛋白B1
                                                             （货号AG21024）购自湖南艾科瑞生物工程有限公司；逆
         （high mobility group protein B1，HMGB1）表达、维持促
                                                              转录及 PCR 试剂盒（货号分别为 R223-01、Q331-02）均
                                 [6]
          炎-抑炎因子动态平衡有关 。HMGB1是一种参与炎症
          反应的多功能蛋白，HMGB1/Toll 样受体 4（Toll-like re‐             购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；无蛋白快速封
                                                              闭液（货号 PS108P）购自上海雅酶生物医药科技有限公
          ceptor 4，TLR4）/核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信
                                             [7]
          号通路与炎症及纤维化的发生密切相关 ，故本课题组                            司；白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死
          推测“易层”贴敷抑制KOA患者SF的作用可能与该通路                          因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶联免疫吸附测
          有关。基于此，本研究拟基于 HMGB1/TLR4/NF-κB 信                    定（ELISA）试 剂 盒（货 号 分 别 为 YJ102828、F15810、
          号通路探讨“易层”贴敷对 KOA 模型动物 SF 的干预机                       YJ002859）均购自上海源桔生物科技中心。
          制，旨在为“易层”贴敷的临床应用提供依据。                               1.3 实验动物
          1 材料                                                    本实验选用 2 月龄 SPF 级雄性 SD 大鼠 24 只，购自
          1.1 主要仪器                                            北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证
              本研究所用主要仪器包括 ABI 7500 型实时荧光定                     号为 SCXK（京）2021-0011。所有动物均饲养于室温
          量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 ABI 公司）、170-3930                 （25±2）℃、相对湿度（60±5）%、每 12 h 昼夜交替的动
          型凝胶电泳及转膜仪（美国Bio-Rad公司）、LAS 4000型                    物房内，自由摄食、饮水，适应性喂养 1 周后开始实验。
          凝胶成像发光系统（美国 GE 公司）、ELX 800 型酶标仪                     本动物实验方案由南京中医药大学实验动物伦理委员
         （美国BioTek公司）等。                                       会审核批准，申请号为202205A046。


          · 408 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 4                               中国药房  2024年第35卷第4期
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