Page 18 - 《中国药房》2024年4期

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病严 Synergy-HT型酶标仪购自美国BioTek公司；Direct-Q型
重的微血管并发症之一，也是许多患者进展至终末期肾 超纯水仪购自美国Millipore公司。
病（end-stage renal disease，ESRD）的主要原因。DN 由 1.2 主要药品与试剂
多种因素相互作用所致，其中高血糖、高血压和遗传因 山茱萸新苷对照品（批号 S-125-190404，纯度＞
素是关键 。DN 的主要特征包括肾小球肥大、超滤，基 98%）购自成都瑞芬思生物科技有限公司；氨基胍原料
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底膜增宽，肾小管间质纤维化和肾小球硬化等，临床主 药（阳性对照，批号 079K1734V，纯度 100%）购自美国
要表现为不同程度的蛋白尿 。近年来，我国DN发病率 Sigma公司；小鼠尿蛋白检测试剂盒（批号20190619）、小
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大幅上升，常规疗法虽然有效，但仍有大部分患者会进 鼠血清肌酐（serum creatinine，Scr）检测试剂盒（批号
展为 ESRD，给其家庭和社会带来了巨大的医疗负担。 20191008）均购自南京建成生物工程研究所；血糖试纸
因此，提高对 DN 发病机制的认识并开发有效的治疗药 购自拜耳医药保健有限公司；小鼠血清尿素氮（blood
物十分必要。 urea nitrogen，BUN）、IL-12 和 IL-10 酶联免疫吸附测定
肾脏功能障碍和炎症反应是DN的2个主要发病机 （ELISA）试剂盒（批号均为 201909）均购自上海酶联生
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制，蛋白尿及肾小球间质纤维化是DN的重要标志 。晚 物科技有限公司；兔源 RAGE、Ⅳ型胶原（collagen type
期 糖 基 化 终 末 产 物（advanced glycation end products， Ⅳ，COL-Ⅳ）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide
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AGEs）在 DN 的病理生理过程中具有重要作用 。研究 synthase，iNOS）多克隆抗体（批号分别为 GR316801-2、
指出，AGEs 与其受体（the receptor of advanced glycation GR269410-2、GR3174950-9）均购自英国Abcam公司；兔
end products，RAGE）结合而引发的氧化应激和炎症反 源β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体（批号AA1217B8088
应最终会导致肾功能丧失 。由于肾脏是一种生物能量 ZJ2）购自美国BioWorld公司；辣根过氧化物酶（HRP）标
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需求较高的器官，高血糖可使其小动脉和微血管发生玻 记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 7074P2）购自美国 CST 公
璃样变性和纤维蛋白样变性，从而导致肾线粒体受损、 司；ECL发光液（批号1819702）购自美国Millipore公司；
肾小管上皮细胞生物能量缺失，最终造成间质纤维化伴 RIPA 组织/细胞裂解液、2.5%Gluta 固定液、10% 中性福
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肾小管萎缩和肾小球硬化 ；同时，单核-巨噬细胞浸润 尔马林固定液（批号分别为R0020、20190820、20190822）
及活化产生的炎症因子又可进一步引起肾脏固有细胞 均购自北京索莱宝科技有限公司；免疫组化检测试剂盒
损伤，进而加速DN的进展 [7―8] 。 （批号 PH1698）购自上海迈新生物技术有限公司；二甲
山茱萸新苷（cornuside，分子式 C24H30O14 ）是一种山 苯（批号CB0130912）购自南京化学试剂有限公司。
茱萸环烯醚萜苷类化合物，可抑制大鼠辅助性T细胞17 1.3 实验动物与饲料
（T helper cell 17，Th17）浸润中枢神经系统，从而改善自 SPF 级 雄 性 KK-Ay 小 鼠 18 只 [8～10 周 龄 ，体 重
身免疫性脑脊髓炎 ；同时，该化合物可抑制核因子 κB （28±2）g]、SPF 级雄性 C57BL/6J 小鼠 6 只[8～10 周龄，
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（nuclear factor kappa-B，NF-κB）向核内转移，降低其转 体重（22±2）g]和高脂高糖饲料均购自北京华阜康生物
录活性，并减少其下游炎症因子[如肿瘤坏死因子 α（tu‐ 科技股份有限公司，实验动物生产许可证号为 SCXK
mor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素6（interleukin- （京）2019-0008。普通饲料购自南京青龙山动物繁殖
6，IL-6）]分泌，从而抑制肥大细胞参与的炎症变态反 场。本实验方案经南京中医药大学实验动物伦理委员
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应 。本课题组前期实验发现，山茱萸新苷可抑制 会审批（申请号201903A019）。
AGEs诱导的小鼠肾系膜细胞增殖，但其能否改善DN尚 2 方法
不明确。基于此，本研究以 DN 模型小鼠为对象，基于 2.1 动物分组与给药
AGEs/RAGE 信号通路初步探讨山茱萸新苷对 DN 模型 取 KK-Ay 小鼠，用高脂高糖饲料喂养 2 周，以空腹
小鼠的保护作用及潜在机制，以期为山茱萸新苷在 DN 血糖（fasting blood glucose，FBG）≥10 mmol/L、24 h 尿
治疗中的应用提供参考。 蛋白较C57BL/6J小鼠升高超过10倍为DN模型建立成
1 材料 功的判定标准 。将造模成功的小鼠随机分为模型
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1.1 主要仪器 组、氨基胍组（阳性对照，100 mg/kg）、山茱萸新苷组
Contour TS 型血糖仪购自拜耳医药保健有限公司； （100 mg/kg），并以 C57BL/6J 小鼠作为正常组，每组 6
Bio-Rad 164-5050型凝胶电泳仪购自美国Bio-Rad公司； 只。各药物组剂量参考本课题组前期研究结果设置，并
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Image Quant LAS 4000 mini 型凝胶成像仪购自美国 GE 以10 mL/kg的容积灌胃 ；正常组和模型组灌胃等体积
公司；BX41 型显微镜购自日本 OLYMPUS 公司；BioTek 生理盐水；每天1次，连续8周。

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