Page 103 - 《中国药房》2024年4期
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其是高龄、肝肾代谢排泄异常和体内循环功能异常的特                           5%A；1～4  min，5%A→95%A；4～6  min，95%A；6～8
          殊患者，其体内的丙泊酚吸收、分布、代谢、排泄特征会                          min，5%A）；流速为 200 μL/min；进样量为 5 μL；柱温为
                                                   [4]
          发生改变，这可能会加剧丙泊酚所致的不良反应 。                            40 ℃；样品仓温度为15 ℃。
              淋巴水肿是由于淋巴管阻塞使得淋巴液回流发生                          2.1.2 质谱条件
          障碍，导致过多富含蛋白质的液体积聚于组织间隙而引                               采用多反应监测模式（multiple reaction monitoring，
          起的水肿    [5―6] 。手术过程中，淋巴水肿患者因淋巴液回                   MRM）进行检测；喷雾电压为－4 500 V；毛细管温度
          流障碍造成大量血浆蛋白积聚在组织间隙或体腔中，影                           为 400 ℃；雾化气压为 30 psi，辅助加热气压为 30 psi，
          响了血液中丙泊酚的代谢、排泄过程，从而影响丙泊酚                           气帘气压为 10 psi，碰撞气压为 6 psi；用于定量分析的
          用药后的安全性       [7―9] 。因此，探究丙泊酚在该类患者体                离子对为 m/z 177.0→161.2、碰撞能量 30 eV（丙泊酚），
          内的代谢、排泄过程，对提高丙泊酚的用药安全性具有                           m/z 149.0→133.1、碰撞能量35 eV（内标）。
          重要意义。                                              2.2 溶液的制备
                                                      [10]
              由于丙泊酚显弱酸性，且具有高亲脂性的特点 ，                         2.2.1 对照品储备液及质控储备液
          导致其在分离色谱柱上的保留特征复杂，而使得分析方                               精密称取丙泊酚对照品 12.00 mg，用甲醇-水（1∶1，
          法的重复性较差。目前，国内外文献虽然已报道了多种                           V/V，下同）溶液溶解并稀释，得质量浓度为10 mg/mL的
          丙泊酚血药浓度的分析方法            [11―13] ，但这些方法的专属性         对照品储备液。同法制备质量浓度为 8 mg/mL 的质控
          和灵敏度均较低。超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-                         储备液。上述溶液均于4 ℃冰箱密封保存、备用。
          MS/MS）技术可通过超高效液相技术对待测物进行分                          2.2.2 内标溶液
          离，并利用质谱检测器对待测物的准分子离子和特征碎                               精密称取内标2.00 mg，用乙腈溶解并稀释，得质量
          片离子进行检测，具有分析速度快、选择性好、灵敏度高                          浓度为 100 μg/mL的溶液。吸取上述溶液 0.5 mL，置于
          的特点 。本研究建立了检测人血浆中丙泊酚浓度的                            500 mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得质量浓度为
                [14]
          UPLC-MS/MS 法，并尝试应用于临床，旨在为临床安全                      100 ng/mL的内标溶液，于4 ℃冰箱密封保存、备用。
          用药提供参考。                                            2.2.3 标准曲线溶液
          1 材料                                                   取“2.2.1”项下对照品储备液 10 μL，加入甲醇-水

          1.1 主要仪器                                           溶液 990 μL，涡旋混匀1 min，得质量浓度为100 μg/mL
              本研究所用主要仪器包括 Acquity H-Class 型超高                的溶液。取上述溶液，用甲醇-水溶液稀释，得质量浓度
          效液相系统（美国 Waters 公司）、QTRAP 5500 型质谱系                分别为0.5、1、2、5、10、20、50 μg/mL的标准曲线工作液。
          统（美国 AB SCIEX 公司）、Quintix 125D-1CN 型电子天            取上述各标准曲线工作液10 μL，加入空白血浆90 μL，
          平（德国 Sartorius 公司）、Sigma 3-18K 型低温高速离心             涡旋混匀 1 min，得质量浓度为 50～5 000 ng/mL 的标准
          机（德国Sigma-Aldrich公司）、Vortex-5型斡旋振荡器（海              曲线溶液。
          门市其林贝尔仪器制造有限公司）；Milli-Q Integral 5 水               2.2.4 质控样品溶液
          纯化系统（美国Millipore公司）。                                   取“2.2.1”项下质控储备液 10 μL，加入甲醇-水
          1.2 药品与试剂                                          溶液 990 μL，涡旋混匀 1 min，得质量浓度为 80 μg/mL
              丙泊酚对照品（批号 100806-201803，纯度 99.9%）、             的溶液。取上述溶液，用甲醇-水溶液稀释，得质量浓度
          麝香草酚（内标，批号 100508-201603，纯度 99.9%）均购               分别为 0.5、0.8、4、40 μg/mL 的质控工作液。取上述各
          自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、氨水均购自美                          质控工作液 10 μL，加入空白血浆 90 μL，涡旋混匀 1
          国Thermo Fisher Scientific公司；水为纯化水。                 min，得质量浓度为50、80、400、4 000 ng/mL的质控样品
          1.3 血浆样品                                           溶液。
              人空白血浆（批号3807253）购自上海谱芬生物科技                     2.3 血浆样品的前处理
          有限公司。                                                  精密吸取待测血浆样品100 μL，置于1.5 mL塑料离
          2 方法与结果                                            心管中，加入“2.2.2”项下内标溶液 200 μL，涡旋混匀 30
          2.1 色谱与质谱条件                                        s，以12 000 r/min离心30 min，取上清液进样测定。
          2.1.1 色谱条件                                         2.4 方法学考察
              以Kinetex C18 （50 mm×2.1 mm，2.6 μm）为色谱柱，            按 国 际 人 用 药 品 注 册 技 术 协 调 会 的 指 导 原 则
          以乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱（0～1 min，                    《M10：生物分析方法验证及样品分析》进行验证。


          中国药房  2024年第35卷第4期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 4    · 477 ·
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