Page 47 - 《中国药房》2024年3期
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Compared  with  the  berberine  group，  the  protein  expressions  of  p-STAT3，  STAT3，  and  SLC7A11  in  the  STAT3+berberine  group
          were  significantly  increased  （P＜0.01） ，  while  the  protein  expression  of  p53  was  significantly  decreased  （P＜0.01）.
          CONCLUSIONS Berberine can induce the ferroptosis of MG63 cells by mediating STAT3/p53/SLC7A11 signaling pathway.
          KEYWORDS    berberine；  ferroptosis；  osteosarcoma；  signal  transducer  and  activator  of  transcription  3；  tumor  protein  53；  solute
          carrier family 7 member 11


              骨肉瘤具有局部侵袭、快速浸润转移和组织特异性                         STAT3）、肿瘤蛋白 53（tumor protein 53，p53）、磷酸化

          等特性，是青少年和儿童中最为常见的原发性骨恶性肿                           STAT3（phosphated STAT3，p-STAT3）、甘油醛-3-磷酸脱
          瘤，给患者生命健康和生活质量带来了严重威胁。目                            氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）
          前，临床上针对骨肉瘤的治疗方式仍以常规的手术切                            一抗和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗（货号
          除、放疗和化疗为主，但骨肉瘤患者易耐受并且其5年总                          分 别 为 bs-20382R、bsm-33058、bs-1658R、bs-41373R、
                      [1]
          体生存率较低 。因此，亟须寻找高效的辅助药物或者                           bs-80295G）均购自北京博奥森生物技术有限公司；转染
          替代疗法。                                              试剂 lipofectamine 2000（批号 11668500）购自美国 Invi-
              小檗碱是从中药黄连以及其他小檗属植物里面分                          trogen公司；过表达质粒pEGFP-N1和pEGFP-N1-STAT3
          离出来的异喹啉类生物碱，能够用于多种疾病的治疗，                          （批号分别为 172281、111934）均购自美国 Addgene 公
          如代谢、消化、神经和心血管系统疾病以及肿瘤                   [2―3] 。有   司；CCK-8试剂盒和细胞核增殖相关抗原Ki-67（nuclear
          研究指出，小檗碱能够通过诱导骨肉瘤细胞的凋亡、自
                                                             proliferation associated-antigen Ki-67，Ki67）一抗（批号分
          噬来抑制其增殖       [4―5] 。铁死亡（ferroptosis）是一种新的调
                                                             别为 G4103、GB111499）均购自武汉赛维尔生物科技有
          节性细胞死亡方式，其特征是铁离子依赖的脂质过氧化                                    2+
                                                             限公司；Fe 检测荧光探针FerroOrange（批号F374）购自
          物大量蓄积，与骨肉瘤细胞生长、耐药等密切相关 。本
                                                    [6]
                                                             日本同仁化学研究所；活性氧（reactive oxygen species，
          课题组前期预实验发现，小檗碱可抑制骨肉瘤细胞的增
                                                             ROS）探针 H2DCFDA（批号 HY-D0940）购自美国 MCE
          殖，但采用凋亡或自噬抑制剂并不能有效缓解小檗碱诱
                                                             公司；免疫染色通透液、免疫染色封闭液、丙二醛（malo‐
          导的骨肉瘤细胞死亡，这提示可能存在其他的细胞死亡
                                                             ndialdehyde，MDA）试剂盒、谷胱甘肽（glutathione，GSH）
          方式。基于此，本研究以人骨肉瘤细胞MG63为研究对
                                                             试剂盒、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白浓度
          象，初步探讨铁死亡在小檗碱抑制MG63细胞中的作用
                                                             检测试剂盒、细胞核蛋白提取试剂盒、电泳迁移率实验
          及其可能机制，以期为临床上骨肉瘤的防治提供新的思
                                                            （electrophoretic mobility shift assay，EMSA）试剂盒、生
          路和治疗靶点。
                                                             物素标记 EMSA 探针、Alexa Fluor 647 标记的山羊抗兔
          1 材料
                                                             荧光二抗、四甲基罗丹明乙酯（TMRE）线粒体膜电位检
          1.1 主要仪器
                                                             测试剂盒（批号分别为 P0096、P0102、S0131M、S0052、
              本研究所用的主要仪器有：Nanodrop 2000 型超微
                                                             P0011、P0027、GS002、GS083B、A0468、C2001S）均购自
          量分光光度计（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），
                                                             上 海 碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ；p53 小 干 扰 RNA
          Spectra Max iD型酶标仪（美国Molecular Devices公司），
                                                            （siRNA）和阴性对照siRNA（negative control siRNA，NC
          DM2500 型荧光倒置显微镜（德国 Leica 公司），JEM-
          1400型透射电子显微镜（日本JEOL公司），5200型化学                     siRNA）套装（批号A10001）购自上海吉玛制药技术有限
          发光图像分析系统（上海天能科技有限公司），1658003-                      公司；兔源溶质载体家族 7 成员 11（solute carrier family
          Mini-Protean  Tetra 小型垂直电泳装置、1703930-Mini          7 member 11，SLC7A11）一抗（批号 D2M7A）购自美国
                    ®
                  ®
          Trans-Blot 型电泳槽（美国 Bio-Rad 公司），5452 型台式            Cell Signa- ling Technology公司。
          高速离心机（德国Eppendorf公司）。                              1.3 细胞株
          1.2 主要药品与试剂                                            本研究所用人骨肉瘤细胞 MG63 购自中国科学院
              小檗碱对照品（批号 BWB50137，纯度≥98%）购自                   上海细胞库。将 MG63 细胞接种于含 1% 青-链霉素和
          北京北纳创联生物技术研究院；胎牛血清和 DMEM 培                         10% 胎牛血清的 DMEM 培养基中，置于含 5%CO2 的
          养基均购自美国 Gibco 公司；兔源信号转导及转录活化                       37 ℃培养箱中培养。当细胞传至第 5 代后用于后续
          因子 3（signal transducer and activator of transcription 3，  实验。


          中国药房  2024年第35卷第3期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3    · 297 ·
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